核酸印迹与分子杂交.pptxVIP

1; 核酸分子杂交 （nucleotide molecular hybridization） 以DNA的变性、复性为理论基础； 指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过复性处理后，形成异源双链的过程。 ;Southern印迹（Southern blot）;Southern blot基本流程;Southern blot关键步骤 待测DNA样品的酶切消化 基因组DNA进行消化，才能在电泳过程 中将不同长短的DNA片段分离开。 基因探针的标记 探针序列和探针信号的选择。要考虑 特定基因的重复性、保守性和稳定性。 可用同位素和非同位素标记。 ; Northern 印迹（Northern blot）; Western blot （蛋白免疫印迹）技术 是将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶中转印 到化学合成膜的支撑物上，利用特异性抗体 进行反应，定性分析蛋白质。 用于分析基因表达(蛋白水平）的变化。 ;原位分子杂交技术;第8页/共38页;聚合酶链式反应; 聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction, PCR） 是一种在体外特异地扩增已知基因的方法； 由K. Mullis于1983年建立；1999年获诺贝尔化学奖。 可用于分析基因及其产物的水平变化； 可进行实时、定量分析； ;　;　;;第14页/共38页;16;RT-PCR与PCR区别 模板为mRNA 需逆转录酶 产物为cDNA;18; 实时、定量PCR技术;20;DNA序列测定;DNA序列分析方法;戊 糖;DNA的序列测定;25;第25页/共38页;DNA自动测序;DNA序列自动分析;DNA自动测序结果举例;DNA序列分析可以揭示基因和基因组一级结构变化; DNA芯片技术; DNA芯片（DNA chip） 也称DNA微阵列(DNA microarray) 在固相支持物上有序固化寡核苷酸或DNA探针，与待测荧光标记样品进行杂交； 通过对杂交信号的检测、比较和分析，得出样品的遗传信息； 包括cDNA芯片和寡核苷酸微阵列;基因芯片工作流程;DNA芯片技术;DNA芯片技术的特点 快速、高效、敏感、平行化、自动化。 通过芯片技术筛选得到的表达信息还要用Northern blot或定量RT-PCR进行验证 DNA芯片技术的应用 肿瘤基因表达谱的差异研究； 基因多态性分析； 微生物筛选鉴定； 遗传病产前诊断等 ;蛋白质???片和组织芯片; 蛋白质芯片技术优势 在蛋白质结构、功能和相互作用，以及 疾病发展过程中蛋白表达谱差异研究等方 面。 在临床医学研究中，利用蛋白质芯片技 术寻找新的肿瘤标记物，各种肿瘤标记物 的筛选，用于早期诊断和治疗效果的监测。; 组织芯片 将组织标本集成在一张固相载体上形成微缩组织切片，在组织切片上高通量获取基因的表达信息。 应用：肿瘤病理学（病因、诊断、肿瘤标记物筛选、治疗等）;感谢您的观看。