高效液相色谱培训.ppt

HPLC的使用与维护;基本原理和特点 液相色谱仪器部件 实验操作与应用 日常维护 ;基本原理和特点;一些商品化仪器;启动液相色谱仪器的流程 ;高效液相色谱仪组成;;8;液相色谱的流动相;液相柱---保留值与pH的关系;2. 流动相类别;对溶剂的要求;不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要求越高放置时间越短。 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。 ;过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动 ;15;16;流动相的保存;1．梯度洗脱的特点;2．梯度洗脱的主要条件;梯度洗脱;21;梯度：低压混合;梯度滞后：系统体积的影响;梯度滞后大小的影响;滞后体积变化的影响;;27;色谱柱的连接 ;锥箍锥度不合适造成渗漏 ;除去柱上端固定相变色部分 (约3mm左右)，再补充新的固定相。 色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适的溶剂进行洗净。 采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。 ;HPLC检测器应提供的功能;理想的HPLC检测器;灵敏度：信噪比;;吸光度检测器（UV/Vis）－ 优点;吸光度检测器（UV/Vis）－ 缺点;背景吸收对紫外检测器噪音的影响;溶剂混合的基线噪音;为何如此重要？;基线噪音对积分的影响;维护流程图;吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时 单向阀－－定期清洗，压力波动大时 泵－－自动清洗 在线过滤器－压力大时清洗;材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％稀硝酸，超声波清洗， 再用蒸馏水清洗 ;;;故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施： 打开排液阀，以异丙醇为流动相输液 拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗 ;故障：堵塞 现象：系统压力波动大或压力 偏高 措施：5％稀硝酸，超声波清洗 判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速1mL/min，如压力3kgf/cm2，则堵塞。;泵的保养：;柱的保养：;色谱柱柱内体积和平衡时间;色谱柱清洗保存 反相色谱柱：用20%甲醇溶液清洗10个柱体积，保存在90%的甲醇溶液中。 分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保存在5%叠氮化钠水溶液中。 离子色谱柱：用0.02M盐，pH6.5溶液清洗10个柱体积，保存在含5%叠氮化钠0.02M盐，pH6.5溶液中。短期保存在低盐的流动相中。;灯的保养：;谢谢！;今天用的图片都为 摄影协会 王诏同学所拍摄