组织化学概况.ppt

组织化学技术;本次课掌握内容;组织化学技术是一门怎么样的课程？学习什么样的技术？主要用处是什么？;调 查 题;组织化学的定义;组织化学的课程地位;细胞学和组织学与组织化学;生物化学与组织化学;注 意;免疫学与组织化学：将抗原、抗体的特异性与组织化学的可见性巧妙的结合起来，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质。 分子生物学与组织化学：将碱基配对的分子杂交原理与组织化学相结合，产生了在核酸原有位置上进行的细胞内核酸定性、定位。 以上两学科的发展，推动了??织化学的进步，扩展的传统意义上的组织化学内涵，形成了多个分支。;组织化学的发展简史——建立;组织化学的发展简史——建立;Vogel(1845年)和Perls(1867年)分别用硫化物和普鲁士蓝法显示铁； Millon的米伦法显示蛋白质(1849年)； Bencke(1862年)将甲苯胺蓝等苯胺染料用于组织学研究（苯胺染料技术发展到高峰的20世纪40年代才活跃起来） Heidenhain发现细胞的嗜铬反应(1870年)； Miescher用甲基绿显示细胞核的染色质(1873年)；;Weigert(1884年)和Mar—chi(1892年)提出髓鞘染色法； Daddi(1896年)首次应用苏丹Ⅲ(sudan m)进行离体脂肪染色； Klebs(1868年)和Stuve(1872年)的过氧化物酶显示法： Ehrlich(1885年)发现细胞色素氧化酶。;Mann自1902年起，逐渐建立了完善的组织冷冻切片技术。 弥补了一般化学固定及石蜡包埋的缺点，可防止酶活性丧失。脂类、多糖类和无机盐的丢失等，推动了脂类、黏多糖及酶组织化学研究的发展。;这些都有力的支持了化学染色理论。 但是由于化学知识的贫乏和显微镜技术的停滞在一定时期限制了组织化学作为一个学科的发展。 直到20世纪30年代组织化学才复兴 1908年Macallum的《组织化学的方法和结果》 1929年Hertwig的《组织化学方法》 1949年Glick的《组织化学和细胞化学技术》 1954年Pearse的《组织化学?理论与应用》;组织化学的发展;组织化学的发展;1955年H. Scheldon和D. Brandes等人把电镜与酶组织化学结合起来，以金属沉淀法观察了酸性磷酸酶和碱性磷酸酶，奠定了电镜酶组织化学基础。 后来Seligman(1967)提出锇黑化法进一步阐述了电镜组织化学的基本原理和反应过程。使组织化学的定位进入到了亚细胞水平。;Coons等（1950）为了在荧光显微镜下能够对酶进行观察，提出了荧光抗体法，从而把免疫学引入组织化学实验中。 Nakane等以辣根过氧化物酶为标记物的酶标抗体法为组织化学开辟了新的途径——酶标法。; 1969年人们把分子杂交技术应用到组织切片和细胞标本上，开始探索原位杂交技术 近20年来，多种亲和物质的发现，如：植物凝集素——糖结合物，生物素——卵白素（亲和素），不但与亲和物质之间有高度的亲和力，而且可以和标记物，如荧光、酶、放射性物质等结合，1976年，开创了亲和细胞化学技术。 ;发展比较快的是定量细胞化学及定量组织化学。其目的是对细胞、细胞的组分和细胞外的产物，在其原位上和活的情况下进行定量化学分析 如：吸收量度法、荧光测定法、干涉量度法、反射量度法、原位定量测定、放射自显影;Gomori（1952）认为组织化学是个混合学科，即组织学、细胞学、生物化学、免疫学等之间的边缘领域 故定义为：在组织和细胞中，以化学或物理实验法，对其某些特殊物质、反应基团和酶促活性进行识别、定位和定量。;组织化学的研究内容;组织化学分支;我国组织化学发展概况;我国组织化学发展概况;我国组织化学发展概况;我国组织化学发展概况;组织化学基本原理;组织化学基本原理;组织化学基本原理;组织化学基本原理;组织化学基本原理;组织化学基本原理;要求的基础;组织化学技术的基本要求 ;2．具有一定的敏感性 显示含量极微的物质，并弥补组织制备过程中化学物质及酶活性的丢失。;3．尽可能地保持组织和细胞生前的形态结构、化学成分和酶的活性。 为此必须选择适当的固定液和恰当的处理方法，如冷冻干燥、冰冻替代、恒冷箱切片、振动切片等。;4．化学反应要求在细胞或组织内进行，须有定位的准确性。 为此必须控制反应的时间和条件，使反应的产物不易位、不弥散。 ;5．反应产物须有显色性和定量的可能性 即必须是有颜色的沉淀或结晶或具有一定的电子密度。 沉淀颗粒细小连续、色深、不溶，稳定，并能保留在原位上。颜色深度要与物质含量或酶的活性具有一定的比例关系。;6．反应要有对照，以利于判断其结果的可靠性。阴性对照和阳性对照。 7、要具有重复性。;1、必须掌握