研究生分子生物学知识点.docVIP

分子生物学知识点总结 1. 蛋白质组（proteome） : proteins expressed by a genome, 即基因组表达的 全套蛋白质。蛋白质组学（Protemics）则是以蛋白质组为研究对象，从整体 角度，分析细胞或组织内蛋白质构成的动态变化和活动规律的科学。 （相互作 用网络PPI） 2. 表达蛋白质组学研究的基本流程：蛋白样品的制备及定量 -总蛋白的双向凝 胶电泳（染色）-凝胶分析软件分析-胶内酶解（胰肽酶）-质谱分析（肽质量 指纹图谱）-数据库搜索鉴定蛋白性质 3. 双向凝胶电泳：相互垂直的两个方向上，分别基于蛋白质不同的等电点和分 子量，先经等电聚焦电泳（isoelectric focusing ， IEF），再经变性聚丙烯 酰胺凝胶电泳（SDS把复杂的蛋白质成分分离。 4. 比较蛋白质组学：通过比较同一个体肿瘤细胞（组织）与正常细胞（组织） 之间蛋白质在表达数量、表达位置和修饰状态上的差异，发现与肿瘤发病或 者发展有关的分子标记，用来作为肿瘤诊断的肿瘤相关蛋白。 5. 软电离：所谓“软电离”是指样品分子电离时保留整个分子的完整性，不会 形成碎片离子。 6. 肿瘤血清蛋白质分析方法（tumor serologic proteome analysis , SERPA: 是从肿瘤免疫学观点出发建立的一种蛋白质组学和肿瘤免疫学相结合的方 法。 SERPA其实验过程如下： ① 双向电泳分离肿瘤组织（细胞）总蛋白质； ② 转膜； ③ 建立western blotting 蛋白质印迹反应图谱（与患者或正常人血清反应）； ④ 软件分析确定差异反应的蛋白质斑点； ⑤ 质谱鉴定和生物信息对肿瘤组织平行胶（replica gel）中相应的差异蛋白 质点进行鉴定，筛选出肿瘤分子标志物； ⑥ 用ELISA、免疫组化等方法对该分子标志物进行原位验证，或者进一步分 析该蛋白功能，研究其在肿瘤进展中发挥的作用。 7. 蛋白质芯片：是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种载体表面， 形成微阵列，根据蛋白质分子间特异性结合的原理，构建微流体生物化学分 析系统，以实现对生物分子的准确、快速、大信息量的检测。 8. 功能蛋白质组学：是指对蛋白质间、蛋白质与DNA/RN间的相互作用的研究。 以细胞内与某个功能有关或某种条件下的一群蛋白质为主要研究内容， 由此 建立细胞内外信号传递的复杂网络。研究方法主要有： 蛋白质芯片技术 目前常用蛋白质芯片有： 1. SELDI-TOF-MS蛋白质芯片 2. 抗体芯片 3. 靶蛋白质芯片 4. 液相蛋白质芯片 噬菌体展示技术 酵母双杂交系统 免疫共沉淀9. 免疫共沉淀（Co-lmmunoprecipitation ）:是以抗体和抗原之间的专一性作用 为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。 是确定两种蛋白质在完整细 胞内生理性相互作用的有效方法。 10. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳基本原理：根据蛋白质分子量不同分离复杂蛋白质 成分。1.制备凝胶试剂：丙烯酰胺（单体）；亚甲双丙烯酰胺（胶联剂）二者 比例29 ： 1；母液浓度30%过硫酸铵（引发剂 引发交联）；N,N,N, N - 四甲基乙二胺（TEMED （加速剂）十二烷基磺酸钠（SDS（阴离子变性剂） 2. 蛋白上样缓冲液3.电泳缓冲液 4.考马斯亮蓝R250染色液5.脱色液 11. Western blotting 基本原理：将SDS-PAG分离的蛋白质转移至 硝酸纤维素 膜（nitrocellulose membrane上，在膜上进行固相免疫化学染色,原位显示 蛋白质带,从而在已知分子量的基础上对蛋白质进行定性、定量分析。 12. Southwestern blotting 基本原理：细胞核蛋白提取物经 SDS-PAG后,转移 至NCM1,然后用标记的DNA探针检测转移至膜上的蛋白质。 细胞死亡形式 表现 Cell death 细胞生命现象不可逆的停止细胞结构和功能的不可逆丧失。 细胞死亡并非与机体死亡同步。正常组 织中也发生细胞死亡，它是维持组织机能和形态所必需的。 细胞坏死 细胞受到外来的急性的强力的致病因素作用下，细胞正常代谢活动被强行中断而引起的“意外” 的、被动性死亡过程；只见于病理情况下。细胞肿胀，线粒体和内质网肿胀。核染色质随机降解呈 絮状，蛋白合成减少。细胞膜、溶酶体破裂，细胞内容物流出，引起周围炎症 Apoptosis 指在一定的生理和病理条件下，多细胞有机体为调控机体发育、维持内环境稳定，由基因控制并遵 循一定程序的细胞主动性死亡过程.又程序性细胞死亡（programmed cell death,PCD）. |凋亡小体: 胞膜皱缩内陷、反折，包围凝集断裂的染色质、胞质、细胞器等形成芽状、泡状突起并分离脱落， 形成一些有膜