美兰染色法检测酵母活性的优化试验----啤酒酵母死亡率--次甲基蓝染色.pdfVIP

美兰染色法检测酵母活性的优化试验 广州珠江啤酒集团有限公司技术中心 （510308 ） 孔祥诚 陈江 李晓聪 吴小映 啤酒酵母质量的检测方法主要分为两类： 一是检测酵母活性， 二是检测酵母 活力。酵母活性是指酵母能否成活的能力， 而酵母活力是衡量活细胞活动能力或 发酵性能的指标。 当然酵母活性比酵母活力对酵母状态的判断要弱， 只限于鉴别 酵母的死活 ,不能明确地分辨活体酵母细胞的质量，但酵母活性的检测方法比酵 母活力的检测相对要简单，检测时间短，在日常的生产检验中应用更强。 美兰（次甲基蓝）染色法对啤酒酵母活性检测简单易行，应用广泛，该染色 法主要是利用细胞膜的完整性与新陈代谢的能力说明细胞活性。 活酵母细胞内具 有还原次甲基蓝呈无色的一种还原酶， 当酵母细胞浸于美兰溶液时， 色素渗入细 胞内， 活细胞内的还原酶能使其脱色， 但死细胞内的还原酶由于失活， 不发生脱 色作用，故被染成蓝色。 文献中查找美兰染色法时， 发现有多种美兰染色液的配制方法。 我们选择了 三种差异较大配制方法进行比较试验， 找出一种染色易于判断， 结果准确的酵母 活性检测方法。 还对美兰染色方法进行优化， 分析操作中易引起误差， 以提高检 测方法的准确性。 1 材料与方法 1.1 L1100 系列生物显微镜 1.2 试剂及配制方法： 1.2.1 方法 1 ：FINK 和 KUHLES 甲基蓝缓冲液： 溶液 A ：次甲基蓝蒸馏水溶液 0.1g/500ml， 溶液 B ：磷酸二氢钾蒸馏水溶液 13.6g/500ml， 溶液 C ：磷酸氢二钠（ 12H O ）蒸馏水溶液 2.4g/100ml， 2 溶液 D ：498.75ML 溶液 B+1.25ML 溶液 C ， 溶液 E：混合 500ML 溶液 D 和 500ML 溶液 A ， 配制的次甲基蓝缓冲液 PH 为 4.6。 1.2.2 方法 2：2%二水合柠檬酸钠次甲基蓝溶液（含有 0.01%次甲基蓝溶液）： 次甲基蓝 0.01g， 二水合柠檬酸三钠 2g， 用蒸馏水定容至 100ml。 1.2.3 方法 3：吕氏碱性美兰染色液： 次甲基蓝 0.3g， 95%乙醇 30ml， 0.01%氢氧化钾溶液 100ml， 将次甲基蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。 1.3 美兰染色法比较试验 配制不同酵母状态的样品（如：扩培酵母液，发酵液，回收酵母，还可对酵 母进行老化处理等）分别用三种美兰染色液对其活性检测。 染色液与酵母样品液等量混合，染色