程序性细胞死亡与细胞衰老.pptVIP

第十一章 （ 十三） 程序性细胞死亡 与细胞衰老;第一节 程序性细胞死亡 第二节 细胞衰老;第一节 程序性细胞死亡;一、动物细胞的程序性死亡二、植物细胞与酵母细胞的程序性死亡;（一）细胞凋亡 （二）细胞坏死 （三）细胞自噬;1. 细胞凋亡的概念和特征 细胞凋亡是受基因调控的主动的生理性细胞自杀行为。 ;凋亡细胞的特征性表现，包括染色质固缩，DNA裂解为200bp左右的片段，细胞皱缩，然后形成由细胞膜包裹的凋亡小体，最后，这些凋亡小体被其他细胞所吞噬。 最重要特征： 凋亡过程中细胞质膜始终保持完整，形成凋亡小体，不引发炎症反应。 ;细胞凋亡的过程及特征;2、细胞凋亡的生理意义 细胞凋亡和细胞增殖都是生命的基本现象，是维持体内细胞数量动态平衡的基本措施。 1）保证胚胎的正常发育。 如蝌蚪尾的消失，指或趾间细胞的凋亡。 2）调节细胞数量 。 如调节神经细胞的数量使之与靶细胞的数 量相当。 3）机体免疫。 杀伤免疫细胞攻击被感染细胞并引起其死亡。 4）在成年阶段清除衰老和病变的细胞。;10;细胞凋亡与人类疾病;3. 细胞凋亡的检测方法; 细胞凋亡的形态学检测; 一般以细胞核染色质的形态学改变来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA特异性染料有： DAPI（4’,6-二脒基-2-苯基吲哚） DAPI与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。 结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。;DAPI染色法观察细胞凋亡 Nuclear morphological changes of HeLa cells in apoptosis process （488nm ?400） ;DNA片段化分析;1: DNA ladder 2: 没有用喜树碱（ CAM）处理的淋巴癌细胞397株系。 3：用喜树碱（CAM）处理的淋巴癌细胞397株系。 4：阳性对照。;末端脱氧核苷转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法，能对DNA分子断裂口中的3’-OH进行原位标记。 借助于荧光标记物，可用荧光显微镜进行观察。;TUNEL 荧光标记法观察细胞凋亡过程中的DNA 片段化;4. 细胞凋亡的分子机制;凋亡方式： 1、Caspase 依赖性的细胞凋亡 2、不依赖于 Caspase的细胞凋亡;（1）Caspase;Caspase家族的特点 以酶原的形式存在，需要活化， C端同源区存在半光氨酸激活位点。 Caspase分为两类：起始酶和执行酶 ;（2）Caspase依赖性的细胞凋亡;在细胞凋亡的内源途径中，线粒体处于中心地位。 线粒体释放凋亡因子（包括细胞色素C，Smac/DIABLO蛋白, 凋亡诱导因子AIF，限制性核酸内切酶G等），其中最关键的是释放细胞色素c。 细胞色素c+凋亡因子Apaf-1+ caspase9酶原→凋亡复合体，活化caspase9 活化Caspase3;细胞凋亡的外源和内源信号途径; (3) Caspase 非依赖性的细胞凋亡;（4）细胞凋亡的调控;IPA 家族的抗凋亡作用能被特异的凋亡激活因子如Smac/DIABLO蛋白解除。;在细胞凋亡的内源途径中，B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2 Bcl-2 ）家族 通过调控调控线粒体外膜通透性而影响细胞色素C的释放。 ;Bcl-2家族：对细胞凋亡起调控作用。 分为两组： 抑制细胞凋亡： Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w。 促进细胞凋亡: Bax, Bad，Bid 影响APAF1的功能 影响线粒体的结构与功能; P53与细胞凋亡;（二）细胞坏死;34; 细胞凋亡与细胞坏死的区别;（三）细胞自噬;细胞自噬参与了细胞死亡过程，是与细胞凋亡不同的另一种程序性死亡。 细胞自噬 主要发生在个体遭遇营养危机的时候以及胚胎发育期间。;二、植物细胞与酵母细胞的程序性死亡;（一）植物细胞的程序性死亡 在正常的植物发育进程，如导管的分化、通气组织的形成等过程，以及对缺氧、高盐环境等胁迫的反应，和病