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植物组织培养的理论基础 植物组织培养的理论基础 PAGE PAGE / NUMPAGESPAGE18 植物组织培养的理论基础 PAGE 植物组织培育的理论基础（重点在观点） 植物细胞工程的观点(Definitionofplantcellengineering)：植物细胞工程是植物生物技术的一个重要构成部分，是在离体培育条件下，在细胞水平上对植物资料进行遗传操作的技术，对植物体的任何一个部分（器官、组织、细胞、原生质体）进行离体引诱使其称为完好植株的技术。  即 细胞全能性的一般观点：每个细胞都含有个体的所有遗传信息，都有分化成一个完好生物个体的固有能力称之为细胞的全能性。 植物细胞全能性表现依据细胞种类不一样从强到弱 : 营养生长中心 形成层 薄壁细胞 厚壁细胞 细胞)； 依据细胞所处的组织不一样从强到弱为： 顶端分生组织 居间分生组织 侧生疏生组织 输导组织 厚壁组织。  (木质化细胞薄壁组织  )特化细胞 (基本组织)  (筛管、导管 厚角组织 所谓细胞分化，是指致使细胞形成不一样构造，惹起功能改变或潜伏发育方式改变的过程。 分化细胞在必定条件下，能够转变成胚性状态，从头获取分裂能力，称为  脱分化。 外植体：植物组织培育顶用来进行无菌培育的离体资料，能够是器官、组织、细胞和原生质体等。 脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织构造、无明显极性的、松懈的细胞团称为 伤组织。 愈伤组织的种类 :胚性愈伤组织 （Embryoneniccallus）和非胚性愈伤组织：  愈 细胞的再分化（redifferentiation)是脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在必定条件下，从头分化为各种种类的细胞，并进一步发育成完好植株。 由愈伤组织再分化形成重生植株， 可经过器官发生和胚状体发生两条门路 。 经过器官发生形成重生植株大概上有三种方式：第一种方式是先芽后根；第二种方式为先根后芽；形成芽和根，再经过维管组织的联系形成完好植株。  第三种方式是在愈伤组织的不一样部位 一般以为，芽和茎原基往常发源于培育组织中比较表层的细胞，即生在组织较深处，是内发源。  外发源，而根原基则发 影响器官分化的要素 1.外植体-地点、状态及组织种类 2.生长调理剂 3.光照 4.温度 培育细胞变异的种类 1、自觉产生的变异， 2、引发产生的变异， 影响离体培育细胞遗传变异的因子 1、供体植株 倍性水平、基因型、外植体细胞的分化程度 2、培育基及培育方式 培育基的成分、物理状态及培育种类 原生质体培育的体细胞变异大于细胞培育的变异，而细胞培育的变异又大于组织器官培育的变异 3、继代培育的次数 一般来讲，继代时间越长、继代次数越多，细胞变异的几率就越大。 优秀变异的挑选方法 （1）直接挑选法 间接挑选法 体细胞无性系变异的利用 1．创建育种中间资料或直接挑选新品种 2．遗传研究 3．发育生物学研究 4．生化代谢门路研究 变异的克制 1、利用比较稳固的品种资料。 2、利用茎尖、幼胚等重生能力较强的组织进行培育。 3、避开使用高浓度激素。 4、不经过愈伤组织，而直接从脱分化细胞重生。 5、尽量促进植株早重生，使培育时间缩短。 植物组织培育（重点在无菌操作） 简述植物离体培育中无菌操作过程。 1、实验器具和资料的准备 2、用75%的酒精擦抹超净工作台，而后室内及超净工作台用紫外灯杀菌 20min-30min。 3、关紫外灯、翻开风机，过 5-10min进入缓冲间，以 75%洗手和手臂，改换无菌服、帽子 和口罩。进入接种室。 4、用70－75％的酒精拭擦台面并消毒双手。试验器具也应当用酒精消毒。点燃酒精灯，将 金属器材在其火焰上灼烧，冷却待用。 5、取流水冲刷（起码30min）过的外植体，用必定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲刷3~4次，放入无菌培育皿中，置于酒精灯火焰下方，用无菌的接种器材进行分别、切割或其余 办理。 6、翻开培育瓶，瓶口在灯焰处旋转灼烧， 用镊子将培育资料置于培育基上， 灼烧镊子放回， 灼烧瓶口，盖上瓶塞。 7、整理台面。 分裂素/生长素的比率是控制芽和根形成的一个重要条件 比率高时——产生芽,比率低时——产生根 种质保留 超低温保留技术 1、保留资料的选择 2、（冷冻前资料） 预办理 （3、增添冷冻防备剂 ） 4、冷冻办理（快速冷冻、慢速冷冻、预冷冻、干燥冷冻） 5、资料保留 6、保留资料解冻（快速解冻、慢速解冻） 7、保留资料复苏培育（再办理） 细胞培育（重点在细胞培育方法、细胞同步化方法、植物细胞培育的特征及悬浮细胞系的成立） 植物细胞培育（plantcellculture）是指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培育使其增殖的技术 由完好的植物器官分别单细胞，叶片是分别单细胞的最好资料。机械法、酶解法（用果胶酶） 由培育组