《毒理学基础》肝脏毒理学PPT课件.ppt

5.1 肝损伤的体内试验评价 体内试验评价是将肝毒物给予受试动物，然后再对动物进行各种生物检测，以评价肝毒物对肝损害的强度和性质。动物的选择、染毒途径与一般毒性试验相似。具体体内试验的检测方法有： 5.1.1 血清酶学检测 5.1.2 肝脏排泄功能检测 5.1.3 肝脏化学组成成分改变的检测 5.1.4 肝脏组织病理学检查 5.1.1 血清酶学检测 其检测评价的基本原理是，肝损伤时，肝酶被释放到血液中，使血清中肝酶活性升高。 血清中不同的酶活性变化反映肝损伤的类型和敏感性不同： 1组较好反应胆汁淤积型肝损伤：碱性磷酸酶、5’-核苷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶； 2组敏感反映细胞毒性肝损伤：A类肝内外组织均存在：谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶；B类主要存在于肝脏：谷丙转氨酶、谷氨酸脱氢酶；C类几乎只存在于肝脏（研究未知肝毒物时具有特别的意义）：鸟氨酸氨基甲酰转移酶、山梨醇脱氢酶； 3组对肝损伤相对不敏感，而对肝外组织损伤敏感：肌酐磷酸激酶； 4组肝细胞损伤时酶活性降低：胆碱酯酶。 5.1.2 肝脏排泄功能检测 根据胆汁与血浆浓度比值，将随汁排泄物质分3类：A类比值等于1：钠、钾、氯离子、葡萄糖等；B类比值大于1（常在10-1000）：胆盐、胆红素、磺溴酞钠及许多外源化学物；C类比值小于1：是一些大分子物质如磷脂、粘蛋白、菊粉、清蛋白等。 B类物质在血中的清除速率减慢，反映肝脏损伤而对这类物质的排泄功能受损。 最常用于检测肝排泄功能损伤的检测方法有血清磺溴酞钠（BSP）和靛青绿（ICG）排泄试验。 磺溴酞钠排泄试验 BSP在体循环中的清除速率取决于肝的摄取。 BSP的清除速率具有饱和性，因此适当的试验剂量选择非常重要。 BSP排泄试验是肝脏排泄功能中较为敏感的指标，其反映胆汁淤积性肝损伤比反映实质细胞性肝损伤更为敏感。 值得注意的是某些外来因素可干扰BSP的分泌与排泄，如肝微粒体酶诱导剂苯巴比妥能大大加快BSP的排泄。 靛青绿排泄试验 ICG与BSP排泄试验意义类似，但ICG有以下特性： 进入血液后很快并几乎完全与血浆蛋白结合； 97%以原形经胆汁排泄； 不从尿液中排泄； 其分泌不受肝外因素的影响； 体重、胆红素、玫瑰红、BSP能干扰其分泌； 无刺激与过敏作用； 血中清除速率与BSP类似。 ICG排泄试验常作为BSP排泄试验的补充试验。 5.1.3 肝脏化学组成成分改变的检测 甘油三酯（TG）：肝损伤使TG的合成增加和释放到血液中减少，使肝内TG蓄积。 葡萄糖6磷酸酶（G-6-P）：肝细胞内质网损伤，导致肝内特异性的G-6-P活性降低。 肝胶原纤维:肝脏受损,贮脂细胞转化为肌成纤维细胞,胶原纤维合成增加,使肝纤维化。 丙二醛（MDA）：肝细胞膜和细胞器膜脂质过氧化，使其产物MDA增加。 肝毒物及其代谢产物与肝细胞生物大分子结合物（加合物）：与DNA、RNA、蛋白质和脂质形成的加合物增加。 5.1.4 肝脏组织病理学检查 常用方法包括： 一般检查 光镜检查 电镜检查 一般检查 整体动物实验结束，解剖受试动物： 肉眼观察肝脏颜色和外观，可发现脂肪肝与肝硬化等改变。 肝脏系数：肝损伤引起肝细胞肿胀、增生，使脏器系数增高；也可因肝细胞坏死吸收，血液供应减少，肝萎缩，使脏器系数降低。 光镜检查 通过光镜可发现肝细胞坏死、肿胀、脂肪空泡、细胞癌变以及肝组织纤维化、结节性增生等多种病理改变。 电镜检查 能提供肝细胞早期损伤的形态学改变依据，鉴别光镜下难于发现的各种亚细胞结构的精细变化： 滑面内质网：受损时引起混合功能氧化酶系活性降低，细胞色素P450降解； 粗面内质网：受损时引起核糖体脱落； 线粒体：受损时表现为肿胀、外膜相对扩张、内外膜空隙增大，嵴缩短甚至消失； 其他：溶酶体膜受损，细胞核致密与固缩，高尔基体断裂及空泡化，糖原颗粒解聚、减少或消失，过氧化小体增加。 5.2 肝损伤的体外试验评价 体外试验是在没有肝外因素影响下来评价化学毒物引起肝损伤。其研究毒对肝的损害作用机制具有特别意义，但却没有考虑生物机体对毒物的整体反应，其外推到人存在较大差距。 5.2.1 离体灌流肝试验 5.2.2 肝匀浆试验 5.2.3 肝薄片孵育试验 5.2.4 原代肝细胞培养试验 5.2.5 肝细胞系（株）试验 5.2.1 离体灌流肝试验 是介于整体动物试验和肝薄片孵育试验之间的体外试验，可用于各种肝毒物的体外研究。 其在保持肝组织结构完整的条件下，运用体外肝灌流技术研究毒物对肝脏生物合成功能、物质代谢、转运和排泄等过程的影响。 优点：保持肝脏的完整性，毒进入肝脏的途径接近生理状态。 缺点：重现性差；仅局限于毒物对肝脏的急性损害研究。 5.2.2 肝匀浆试验 肝匀浆试验用于毒物代谢、蛋白质合成能力和脂质过氧化作用等研究。 本试验的缺点是失去了正常存在的细胞内各种