原发性肝细胞癌病人PBMCs中HBVXP基因的整合医学.docVIP

原发性肝细胞癌病人PBMCs中HBVXP基因的整合医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：原发性肝细胞癌病人PBMCs中HBVXP基因的整合医学 1 1 资料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：胃癌组织中SOX4基因的突变分析医学 6 1 材料与方法 7 2 结果 8 4、5为SOX4基因发生突变的癌组织 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 原发性肝细胞癌病人PBMCs中HBVXP基因的整合医学 文1：原发性肝细胞癌病人PBMCs中HBVXP基因的整合医学 ［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the relatiohip between primary liver cancer （PLC） and integration of HBV X gene and P gene in peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） in PLC patients. MethodsPrime X1， X2 were designed for HBV X Gene and P1， P2 for P gene. Extracted DNA from isolated PBMCs in 40 PLC patients with HBsAg positive. PCR was used to determine the integration of HBV P and X gene. ResultsThe integration of X gene and P gene was % （31/40） and % （6/40） respectively. The difference was significant （ χ2 =，P ）. ConclusionThe integration of HBV X and P ex-ists in peripheral blood mononuclear cells， and the expression of X gene plays a major role in the occurrence of primary liver cancer. ［KEY WORDS］carcinoma， hepatocellular; hepatitis virus， type B; genes; virus integration 乙型肝炎病毒（HBV）为嗜肝DNA病毒，主要侵犯肝脏，也可侵犯肝外组织，尤其是外周血单个核细胞（PBMCs）［1，2］。人体感染HBV后可导致病毒携带者、急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、爆发性肝衰竭等不同临床类型，部分慢性乙型肝炎可发展为肝硬化，大约30%～40%的肝硬化病人最终可发展为肝细胞癌（HCC）。尽管HCC发生的分子生物学机制尚不十分明确，但已确定慢性乙型肝炎病毒感染为HCC的主要致病因素，HBV感染者发展为HCC的危险性是未感染者的100倍以上［3］。研究认为，HBV感染可能通过多种途径引起HCC发生，其中HBV DNA整合于肝细胞基因组是HCC发生的主要机制之一;此外，也有研究发现HBV基因可以整合于PBMCs中［ 4 ］。本文采用PCR检测PBMCs中HBV X、P基因的整合情况，以探讨它们与HCC的关系，现报告如下。 1 资料与方法 研究对象临沂市人民医院2003～2004年住院确诊的HBsAg阳性的原发性HCC病人40例，男34例，女6例;年龄38～72岁，平均（±）岁。其中Ⅰ期3例，Ⅱ期15例，Ⅲ期22例。 5例HBsAg阴性的原发性HCC病人和5例HBsAg阴性的健康体检者作阴性对照和健康对照。 主要试剂 DNA提取试剂盒、Taq DNA聚合酶均为Pro-mega 公司产品;无RNase的DNaseⅠ为Sigma公司产品;引物由上海生工公司合成。 PBMCs的分离和细胞中基因组DNA提取 所有研究对象均于早晨无菌抽取空腹静脉血 5 mL， 置于EDTA抗凝的无菌试管中，4 ℃保存运输，标本收集后4 h内使用低渗溶解红细胞法提取全血中PBMCs。使用Promega 公司的DNA 提取试剂盒提取1 mL全血PBMCs中的细胞基因组DNA。 引物设计 从GenBank获得多株HBV的P基因及X基因全序列，用DNAStar软件分析编码DNA多聚酶-逆转录酶P基因的高保守序列及包含DR2在内 的X基因序列，分别设计P、X基因的上、下游引物，序列见表1。 表1 P、X基因的上、下游引物序列（略） PCR检测X、P基因在PBMC