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大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：脑缺血再灌注诱导大鼠信号转导与转录激活子1的变化 5 1 材料与方法 6 2 结果 8 3 讨论 8 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化 文1：大鼠脑缺血再灌注后NCAM基因表达的变化 ［ABSTRACT］ObjectiveTo observe nerve cell adhesion molecule （NCAM） expression after reperfusion of focal cerebral is-chemia in rats. MethodsThe model of focal ischemic reperfusion in SD rats was induced by intraluminal middle cerebral artery （MCA） occlusion with a nylon monofilament suture. In situ hybridization was performed to examine the expression of NCAM mRNA at 2，6，12 h and 1，2，3，7，14 d after reperfusion. ResultsIn the cortex， NCAM mRNA expression was observed at 2 h after reperfusion， peaked at 12 h， and returned to basal level on day 14; in striatum， the expression reached the peak after one day， the rest were same as in the cortex. ConclusionThe sustained increase of NCAM expression following reperfusion suggests that the NCAM might play an important role in neural recovery. ［KEY WORDS］cerebral ischemia; reperfusion injury; cell adhesion molecules， neuron; gene expression;rats 神经细胞黏附分子（NCAM）是免疫球蛋白超家族中的一员，在神经元突触塑形，在脑、视神经、嗅神经组织中NCAM保持低水平表达。有证据表明，NCAM能促进控制学习功能脑组织的重塑并显著刺激神经细胞的生长［1］。NCAM参与神经元的黏附与神经生长，与突触结构的维持、模式重建及神经元出芽都有密切的关系。实验证实，NCAM能促进脑损伤后神经细胞的重塑。短暂性全脑缺血后，海马颗粒细胞的NCAM表达增加［2］，大脑中动脉缺血再灌注后，在纹状体的室下区也可见到NCAM表达增加［3］。本实验旨在探讨脑损伤后NCAM基因表达的变化规律及其在脑损伤后脑组织重新修复过程中的作用。 1 材料与方法 动物和分组 成年健康雄性Sprague Dawley大鼠36只，体质量230～280 g，清洁级，由中国科学院上海实验动物中心提供。应用线栓法经左侧颈外-颈内动脉插 线建立左侧大脑中动脉缺血（MCAO）再灌注模型。随机分为缺血90 min再灌注2 h、6 h、12 h、1 d、 2 d 、3 d、7 d、14 d组和假手术组，每组4只。假手术组除不插线外，余步骤同实验组。 标本采集和组织切片制备 各组大鼠在规定的时间点取材，假手术组于手术后1 d取材。大鼠在100 g/L水合氯醛麻醉下，经左心室插管给予40 g/L多聚甲醛灌注固定后取脑，标本置入40 g/L多聚甲醛后固定2 h，蒸馏水浸泡4 h。常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋，连续冠切片，厚度7 μm，粘于多聚赖氨酸处理后的玻片上，温室保存，用于NCAM mRNA原位杂交及其对照实验。 原位杂交检测 NCAM mRNA原位杂交试剂盒、DAB显色试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供。严格按照试剂盒说明操作，DAB显色30 min后水洗，封片。光镜下观察，细胞核或细胞浆出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。 统计处理 高倍镜下（400倍）每例标本在皮质区和纹状体 区随机各取4个不重叠的视野计