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视网膜缺血再灌注损伤后凋亡相关基因表达的变化 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：视网膜缺血再灌注损伤后凋亡相关基因表达的变化 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：心脏缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶的变化 6 1材料和方法 6 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 视网膜缺血再灌注损伤后凋亡相关基因表达的变化 文1：视网膜缺血再灌注损伤后凋亡相关基因表达的变化 ［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expression of WTp53，bax and bcl-2 in retina ischemiaeperfusion injury and explore the mechanism. MethodsTwenty-eight rats were randomly divided into normal （4 rats） and ischemia group， and the latter was subdivided into 1，6，12，24，48，and 72h after reperfusion， respectively. The rat model of experimental retina ischemiaeperfusion injury was made by increasing the intraocular pressure. The expression of WTp53， bax and bcl-2 was determined by streptavidin-biotin complex （SABC） immunohistochemistry. Results In ischemia group， WTp53 expression and bax expression increased significantly （ F=，;q=; P ），while the bcl-2 expression had little change. Conclu-sionWTp53 and bax expression increase in RIRI. WTp53 and bax may play a part in RIRI by promoting apoptosis. ［KEY WORDS］retina; reperfusion injury; genes，WTp53; genes， bax; genes， bcl-2; rats， Wistar 视网膜缺血再灌注损伤是眼科常见的病理过程，严重影响病人视功能。其发生机制十分复杂，已成为近年眼科的研究热点之一。目前研究发现，视网膜缺血再灌注损伤中存在着神经细胞凋亡现象，且凋亡是视网膜神经细胞丢失的重要因素之一［1］。本实验通过建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，研究凋亡相关基因野生型p53（WTp53）、bax和bcl-2的表达变化，探讨视网膜缺血再灌注损伤的发生机制。现将结果报告如下。 1 材料与方法 实验材料 动物及分组 健康无眼疾的Wistar大鼠（青岛市实验动物与动物实验中心提供）28只，体质量250～300 g，雌雄不拘，室温环境饲养。随机分为两组:正常组（4只）、缺血再灌注组（24只），其中缺 血再灌注组又分为再灌注后1、6、12、24、48和72 h等6个组，每组4只大鼠。 主要试剂 兔抗大鼠WTp53、bax、bcl-2多抗（美国Santa Cruz生物技术公司生产），链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（SABC）免疫组化试剂盒（武汉Boster生物工程公司） 实验方法 动物模型的建立 采用前房穿刺加压法建立大鼠缺血再灌注损伤模型，方法见文献［2］ 标本的取材、固定与切片 分别于再灌注后1、6、12、24、48、72 h处死动物，摘除眼球，制作石蜡切片，方法见文献［2］ 免疫组织化学染色 将标本的石蜡切片脱蜡至水，用蒸馏水新鲜配制体积分数过氧化氢室温放置10 min，以灭活内源性过氧化氢酶，复合消化液室温浸浴10 min修复抗原，正常山羊血清室温 10 min封 闭非特异性抗原，加一抗（兔抗大鼠WTp53、bax、bcl-2多抗） 37 ℃孵育2 h， 加二抗（生物素化山羊抗兔IgG）37 ℃水浴20 min，SABC法染色，DAB显色，苏木精轻度复染，脱水、透明、封片。 结果观察及数据处理 每只眼球取两张切片进行分析，应用双目光学显微镜（400倍）分别观察WTp53、Bax、Bcl-2蛋白表达（阳性染色呈棕黄色）。应用图像分析系统对免疫组化切