枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析.docVIP

枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析 1 1 材料与方法 3 2 结果 5 3 讨论 7 文2：植物基因组DNA提取方法综述 9 1 提取原理 9 2 植物组织取材及保存方法 10 3 植物基因组DNA提取方法 11 4 植物基因组DNA纯度检测 13 5 植物基因组DNA提取纯度的影响因素 15 参考文摘引言： 17 原创性声明（模板） 19 文章致谢（模板） 19 正文 枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析 文1：枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析 Extraction of Genomic DNA from Lycium bararum and Its Fingerprint Analysis Abstract：ObjectiveTo develop valid method to extract DNA from Lycium bararum for RAPD analysis and research its DNA fingerprint by using RAPD technology. MethodsThe extracts of high quality genomic DNA was extracted from the frozen leaves of Lycium bararum by modified CTAB method and its fingerprint was analyzed by RAPD. ResultsThe clear fingerprints of the extracts of genomic DNA could be got by RAPD. Two RAPD prime were applied to do random amplification. A total of 56 DNA bands was detected, 44 among which were polymorphic, the average rate of polymorphic bands was %.ConclusionThe modified CTAB method was valid,quick and didn＇t need phenol extraction. This isolated DNA could be used directly for RAPD analysis without sedimentation in cesium chloride gradient or column RAPD marke can be used for the studies of fingerprint of Lycium bararum seitively. Key words：Lycium bararum; Genomic DNA； RAPD； Fingerprint RAPD由Williams和Welsh两个研究小组几乎同时于1990年建立起来的一项分子标记技术［1,2］，是目前中药研究者最常使用的DNA标记技术。RAPD标记所需样品基因组DNA的量仅为10 ng，且RAPD引物已商品化生产。因此，它可以在不知道特异DNA序列的情况下检测DNA的多态性，尤其在目前绝大多数动、植物中药材DNA序列尚不清楚的情况下，在中药品种研究方面RAPD标记比其它分子标记更具有广阔的应用前景［3］。虽然DNA分子标记技术在枸杞属植物鉴定等方面已有一些报道，张艳波等［4］收集了6种枸杞属植物，其中2个正品，4个混淆品种，运用RAPD技术进行分析，获得了枸杞属不同种的特异性DNA指纹图谱，从而将它们准确区别。郑可大等［5］收集了20个台北市场枸杞商品，运用RAPD技术进行分析，获得了2个DNA指纹图谱类型，推测其中15个是正品枸杞，5个混淆品。魏玉清等［6］对宁夏不同地区主栽枸杞品种利用RAPD技术进行了鉴别。但目前分子标记用于枸杞属植物研究的种类和数量都十分有限，本实验所选的部分枸杞材料未见有RAPD研究报道。获得高质量的DNA样品是进行RAPD分析的首要步骤。目前，有许多植物基因组DNA提取方法［7～9］。要用于RAPD分析，DNA提取步骤越少越好，能减少对DNA的破坏；多步骤、多种试剂容易引起DNA的破坏和污染，从而影响PCR反应及PCR扩增产物的结果分析。关于从枸杞果实中提取基因组DNA有一些报道［4,5～10,11］，而有关从枸杞叶片中进行基因组DNA提取与PCR分析的详细研究尚未见报道。枸杞(Lyciu