比浊法快速测定硫酸多黏菌素E效价.docVIP

比浊法快速测定硫酸多黏菌素E效价 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：比浊法快速测定硫酸多黏菌素E效价 1 1 材料与方法 2 2 结果与讨论 4 3 结论 6 文2：硫酸多黏菌素E水溶液的表面张力和泡沫性能的研究 6 1 实验部分 7 2 结果与讨论 8 3 结论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 比浊法快速测定硫酸多黏菌素E效价 文1：比浊法快速测定硫酸多黏菌素E效价 Fast determination of the potency of polymyxin E by turbidimetry assay ABSTRACT A turbidimetry assay for fast determination of polymyxin E potency was developed by studying on the influencing facto. Compared with Oxford assay, turbidimetry assay decreased the determination time from 20 hou to 4 hou. There was a linear relatiohip between the potency of polymyxin E and the logarithm of absorbency in the range of 30～100u/ml and inoculating concentration was 5%, with 4hour culture time. The turbidimetry assay had a good reproducibility, and the relative error was less than 5% KEY WORDS Polymyxin E; Turbidimetry assay; Potency 多黏菌素E(polymyxin E或colistin)是由多黏芽孢杆菌抗敌素变株(Bacillus polymyxin nus)经发酵培养生产的一种环状多肽类抗生素，它对革兰阴性杆菌有强烈的抑菌作用［1］。由于多黏菌素E具有高效、低毒、残留少的特性，将其硫酸盐制成兽药用于防治由大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、沙门菌等革兰阴性菌［2］引起的肉鸡、猪、牛等畜禽的肠道疾病。目前采用杯碟法［3，4］测定其生物效价。杯碟法操作步骤复杂，耗时长，测定时间需要大约20h，不能快速反馈 工业 生产中各个阶段产品生物活性，必须开发一种快速测定硫酸多黏菌素E效价的方法。比浊法是抗生素效价微生物检定的方法之一［5～8］，其原理是将一定量的抗生素加至接种有试验微生物的液体培养基内，混匀后，经短期培养，测量培养物的吸光度，在一定线性范围内细菌培养物吸光度的对数值logA与抗生素的浓度成正比，比浊法具有检测快速的特点。本文深入研究了比浊法测定硫酸多黏菌素E效价的影响因素和规律，建立了硫酸多黏菌素E的比浊法快速检测方法。 1 材料与方法 材料 (1)检定菌 大肠埃希菌(CMCC(B)44102)购自微生物菌种保藏中心。 (2)硫酸黏杆菌E素(硫酸多黏菌素E)标准品 中国 兽医药品监查所提供，批号K，效价19536u/mg。 (3)主要仪器 752紫外分光光度计；恒温水浴振荡器；牛津杯(不锈钢，高100mm，外径，内径)；PHS3C精密pH计。 方法 (1)检定培养基的制备 称取蛋白胨8g，牛肉膏4g，酵母粉5g，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾1g，氯化钠，葡萄糖，加蒸馏水至1000ml加热混匀，调节pH值为，过滤，115℃灭菌30min。 (2)检测菌液的制备 取大肠埃希菌的琼脂斜面培养物一支，加%灭菌生理盐水1ml洗下菌苔转入茄瓶，37℃培养18～22h，用%灭菌生理盐水15ml洗下菌苔，制成菌液，在分光光度计上波长为600nm处用%灭菌生理盐水调节菌液吸光度值(A=2左右)，用此菌液分以%、5%和10%的接种量接种至检定培养基作为检测菌液。 (3)硫酸多黏菌素E标准溶液的配制 精确称取硫酸多黏菌素E标准品，用的磷酸盐缓冲液稀释到600u/ml，再用水稀释成浓度分别为30、40、50、60、70、80、90和100u/ml等8种浓度的标准溶液。 (4)比浊法吸光度测定 精密吸取1ml硫酸多黏菌素E溶液，加9ml检测菌液，放入恒温水浴摇床以200min转速37℃振荡培养一定时间，取出，立即用冷水冷却，摇匀，以9ml未接种检定培养基和1ml水混合液作参比，用分光光度计在600nm波长处［9］分别测定吸