阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达.docVIP

阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达 1 1材料和方法 2 文2：阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达 4 1材料和方法 4 参考文摘引言： 7 原创性声明（模板） 8 文章致谢（模板） 9 正文 阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达 文1：阿司匹林调节小鼠移植性肝癌的基因表达 0引言 不少学者认为在肿瘤发生、 发展 和转移的各阶段, 至少有两个或两个以上功能不同异常激活的癌基因各自发挥不同作用, 并在时间和空间上相互配合，突变的p53基因增强了蛋白激酶C对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的诱导［1］. 肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一, 估计每年新发患者在10万以上,死亡率高,生存期短,其发病机制尚不完全清楚. 因此, 研究VEGF,p53与肝癌发生的关系具有一定的意义［2］. 阿司匹林可调节很多基因的表达，我们研究了阿司匹林对肝癌细胞内的VEGF，p53表达的影响. 1材料和方法 材料昆明种雄性小鼠60只, 清洁级, 体质量（20±2） g , 购买于武汉大学实验动物中心. 试验药物阿司匹林和5FU为医用药物,瘤株H22肝癌细胞系由武汉大学病 理学 教研室提供. 试剂VEGF mAb, p53 mAb均购自晶美生物技术公司. 方法昆明种雄性小鼠60 只, 随机分为A~ F 6组；F组为正常饲养组,A~ E组进行造模. 无菌抽取接种H22瘤种8 d的小鼠的腹水, 调细胞密度至1×1010/L , 迅速右腋皮下接种 mL. 24 h后A组予80 g/L阿司匹林；B组予40 g/L阿司匹林； C组予20 g/L阿司匹林；D组予20 g/L 5Fu； E组予生理盐水,皆为1 mL，1次/d. 10 d停药, 24 h后称质量并处死动物, 用无菌操作完全剥取瘤块称质量,计算出肿瘤生长抑制率：抑制率= ［ (阴性对照组平均瘤质量- 治疗 组平均瘤质量) /阴性对照组平均瘤质量］×100 %. 生理盐水冲洗瘤块后,制成石蜡切片. 未造模的10 只为正常饲养组(F组) , 不作任何处理, 予以上5 组饲以正常饲料及水分,在实验结束时取肝组织,制成石蜡切片观察VEGF和p53表达. VEGF 和 p53表达按免疫组化说明书进行，选择切片中4 个染色反应最强的视野, 在400倍显微镜下, 每例计数 至少800个肿瘤细胞,细胞染色呈浅黄色至棕褐色均认为是阳性染色. 计算出阳性染色肿瘤细胞与所计数之肿瘤细胞的百分比,根据百分比和着色深浅计分. 无阳性细胞计为0 分,阳性细胞百分比在0 % ~ 25 %之间计为1 分,在25 % ~75 %之间计为2 分, 75 %计为3 分［3］ 统计学处理： 实验结果以x±s表示, 多组间比较采用方差分析，两组间比较采用LSD检验(SPSS ), P0. 05为差异有统计学意义. 2结果 移植性肝癌的抑瘤效果及VEGF, p53表达水平由表1可知，A, B, C, D各组瘤质量均低于E组 (P)；A组和D组的瘤质量低于B, C组 (P) ,抑制率均高于B, C组 (P)； B组与C组瘤质量、抑制率差异无统计学意义 (P). VEGF积分和p53积分A, B, C, D组均低于E 组 (P)； A, D组低于B, C组 (P)； A 组与D组相比, 差异无统计学意义(P). 表1各组小鼠体质量、肿瘤抑制率的比较 和p53表达VEGF 仅在正常小鼠肝脏内皮细胞有表达, 而肝细胞未见阳性染色, 也未发现p53阳性染色（图1A）. 瘤组织中VEGF肝癌细胞浆染成棕黄色, 呈阳性染色(图1B), 造模各组均可见到, 但阳性程度不同. 造模各组中可见p53 为细胞核阳性染色（图1C）.A： 肝组织VEGF表达；B： 瘤组织VEGF 表达；C： 瘤组织p53 表达. 3讨论 VEGF, p53在肿瘤发生、 发展 和转移的各阶段发挥着重要作用，目前的研究认为，它们之间的作用不是孤立的,可能在时间和空间上相互配合, 协同促进了细胞的癌变［4］. Folkman 认为，肿瘤的发生是一个多步骤的过程, 而血管生成是肿瘤发展的限速步骤, 在肿瘤进展中血管生成这一表型可能是原癌基因激活和抑癌基因失活的结果,这一点在Olga的试验中得到了证实: p53突变使VEGF的表达量升高, p53突变在肿瘤血管生成开关中起到了重要作用. 从本实验结果看, 肝癌组织VEGF, p53表达较正常肝组织有明显差异, 说明肝癌的发生与VEGF，p53有一定关系. 阿司匹林对H22移植性肝癌的抑瘤效果显示, 接种H22移植性