一种检测液体生物样本葡萄糖含量的弛豫核磁共振方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112067647 A (43)申请公布日 2020.12.11 (21)申请号 202011250748.9 (22)申请日 2020.11.11 (71)申请人 东南大学 地址 211189 江苏省南京市江宁区东南大 学路2号 (72)发明人 易红　陆荣生　陈逸　倪中华　 (74)专利代理机构 南京瑞弘专利商标事务所 (普通合伙) 32249 代理人 沈廉 (51)Int.Cl. G01N 24/08 (2006.01) 权利要求书2页 说明书4页 附图2页 (54)发明名称 一种检测液体生物样本葡萄糖含量的弛豫 核磁共振方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测液体生物样本葡萄 糖含量的弛豫核磁共振方法，该方法以葡萄糖氧 1 化酶和酸化高锰酸钾作为反应底物，通过 H‑NMR 检测弛豫时间的变化来计算被测样本中葡萄糖 含量。具体包括步骤a)：将被测样本以一定比例 加入无水乙醇或其他等效有机试剂混匀后静置， 使样本中干扰蛋白变性沉淀；步骤b)：取上层清 液蒸发残留有机试剂；步骤c)：分为A、B组分别加 入检测液及对照液进行反应；步骤d)：用核磁共 振仪器检测A、B组间弛豫差；步骤e)：根据测得的 弛豫时间差与该样本类别下已知模型计算被测 A 样本的葡萄糖含量。通过本发明方法，可以有效 7 检测多种液体生物样本中的葡萄糖含量，有助于 4 6 7 进一步研究核磁共振技术在生物糖检测方向的 6 0 2 应用。 1 1 N C CN 112067647 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种检测液体生物样本葡萄糖含量的弛豫核磁共振方法，其特征在于，以葡萄糖氧 化酶和酸化高锰酸钾作为反应底物，并利用有机试剂除去生物样本中原有的蛋白质干扰， 1 通过 H-NMR弛豫检测高锰酸钾弛豫时间的变化来计算被测样本中葡萄糖含量，该方法具体 包括如下步骤： 步骤a.将被测液体生物样本加入无水乙醇或其他具有相同效果的有机试剂混匀后静 置，使样本中大蛋白变性沉淀：液体生物样本事先进行预冷，随后加入同样经预冷的无水乙 醇或其他有机试剂，充分翻转混匀后在预冷温度下静置，等待发生变性的蛋白质充分沉淀； 步骤b.取上层清液蒸发残留有机试剂：将产生沉淀的样本液进行离心，取出分离的上 清液，分为等量的两份记为A、B组，置于干燥箱充分蒸发； 步骤c.将A、B组分别加入标准检测溶液及对照组空白溶液进行反应：A组加入含有葡萄 糖氧化酶及高锰酸钾的酸性溶液，空白对照组B组加入只含有等浓度高锰酸钾的酸性溶液， 分别混匀； 步骤d.用核磁共振仪器检测A、B组弛豫时间之差：将最终反应完成的A、B组分别取样进 行核磁共振检测其弛豫时间T 、T或其他可表征样本弛豫的测量量，两组弛豫时间的差值记 1 2 为ΔT； 步骤e.根据测得的弛豫时间差与该样本种类已知的数据模型对照得出被测生物样本 的葡萄糖含量：将被测液体生物样本的A、B组ΔT作为输入量代入已知的数据模型，得出的 输出量即为测得的葡萄糖含量。 2.根据权利要求1所述的一种检测液体生物样本葡萄糖含量的弛豫核磁共振方法，其 特征在于，所述被测液体生物样本包括全血、血清、尿液、唾液及含有葡萄糖且质地为液体 的生物来源类样本，其中具有一些干扰检测的白蛋白、球蛋白、粘蛋白，在有机溶剂中发生 变性，产生絮状或团块状沉淀物。 3.根据权利要求1所述的一种检测液体生物样本葡萄糖含量的弛豫核磁共振方法，其 特征在于，所述蒸发残留是将液