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血氨浓度测定方法学研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：血氨浓度测定方法学研究 1 1 仪器与试剂 2 2 方法与结果 2 3 讨论 5 文2：CDM风电项目方法学研究 7 一、CDM的实施框架和方法学简述 7 二、风电项目的方法学 7 1、基准线 7 2、额外性 9 三、结语 10 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 血氨浓度测定方法学研究 文1：血氨浓度测定方法学研究 正常人体内游离血氨（blood ammonia，BA）含量极低（正常值20～60 μmol/L）［1］，其主要来源于体内蛋白质在代谢过程中产生的氨基酸，以及经脱氨作用分解而来的内源性氨，正常情况这种氨可形成酰胺及合成其他含氮化合物而不断地被转化；另一来源是蛋白质类食物在肠道内经细菌分解而成的外源性氨，正常情况下此氨经门静脉进入肝脏被合成为脲，经肾脏排出体外。然而在发生代谢障碍性疾病，如肝性昏迷、肝性脑病、重型肝炎、尿毒症等由于氨不能正常代谢排出体外而引起BA升高。肝功能极度衰竭或血液不能正常地流经肝脏转换等严重肝脏疾病，氨不能从循环中及时清除均可使血氨增高［1］。高BA有神经毒性，BA的测定对于肝硬化门脉高压、肝昏迷、Reve’s综合征及儿科的一些先天性代谢紊乱等病的诊断、观察和预后判断有着重要意义［2］。BA的测定方法有微量扩散法、比色法、离子交换法、氨电极法、酶法等。笔者在结合本实验室现有条件，参考国内外有关 文献 建立快速、准确的检测BA方法，为临床该类疾病的诊断、 治疗 提供参考。 1 仪器与试剂 仪器 电子 天平 COBS120型（朝鲜COBS公司），紫外分光光度仪HP8453（美国惠普），离心沉淀器800型（上海手术仪器厂），YKHI型液体快速混匀器（江西医疗器械厂），DHW420三用电热恒温水箱（北京东霞 科学 仪器厂） 试药 钨酸钠（天津市大茂化学试剂厂，批号030906），硫酸铵（重庆北碚化学试剂厂，批号050329），亚硝基铁氰化钠（上海三爱思试剂公司，批号），苯酚（重庆北碚化学试剂厂，批号：），氢氧化钠（重庆川江化学试剂厂，批号），次氯酸钠（重庆川东化工集团化学试剂厂，批号），硫酸铵（重庆北碚化学试剂厂，批号050329），硫酸（重庆川江化学试剂厂，批号），所用试药均为分析纯，水为新制无氨蒸馏水。 2 方法与结果 储备溶液的配制［2］ 无氨水的制备：参照文献［3］取重蒸水1 000 mL，加稀硫酸1 mL与高锰酸钾试液1 mL，蒸馏即得备用。 酚显色剂：精取亚硝基铁氰化钠 mg，与适量苯酚混合后加无氨水至100 mL,过滤即得。 碱性次氯酸钠溶液：精取250 mg次氯酸钠，氢氧化钠2 500 mg，溶于100 mL无氨水中即得。 mol/L硫酸溶液、5 mmol/L硫酸铵溶液参照文献方法［3］配制。 标准溶液的配制 分别精取“”项的硫酸铵储备液20、200、500、1 000、1 500、2 000、4 000 μL置于50 mL容量瓶，立即加无氨水至刻度即得10、20、50、100、150、200、400 μmol/L的硫酸铵系列标准溶液。 标准曲线的制备 取“”项的硫酸铵系列标准溶液各1 mL，分别加入10 %的钨酸钠溶液、 mol/L硫酸溶液各 mL，涡旋震荡1 min，4 000 min离心5 min，分取上清液1 mL，依次加入酚显色剂和碱性次氯酸钠溶液各1 mL，涡旋1 min后置37 ℃水浴20 min，以空白管校正后于630 nm处测定OD值；将所测得的吸收度OD值对浓度进行线性回归处理得回归方程：OD=+，相关系数r=，根据(NH4)2SO4与游离氨的定量关系，即得游离氨浓度在5～200μmol/L的定量线性范围（见图1） 临床样本的测定 参考国内外有关文献，经优化后测定BA的方法为：离体血液立即加入过量定量的10%钨酸钠及 mol/L硫酸溶液，使蛋白沉淀的同时，血液中的氨与硫酸形成硫酸铵而存留于血滤液中，再以酚次氯酸钠显色剂显色后于波长630 nm处测定OD值，即可定量测定BA。 方法的回收试验 按“”项的方法分别配制高、中、低（400、200、40 μmol/L）的硫酸铵标准溶液适量，各取1mL分别加入1 mL无氨正常血浆，混匀后精密量取1 mL按项下的方法分别精密加入 mL 10 %钨酸钠和 mol/L硫酸溶液各 mL，以下按准曲线项下相应的方法处理并分别测定其OD值，将测得的OD值代入标准曲线 计算 测得量与回收率，结果见表1。表1 血氨回收试验（略） 精密度试验 配制低、中、高（25、50、75 μmol/L）3个浓度含无氨正常血浆的