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土壤环境基因组技术及其在新药发现中的应用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：土壤环境基因组技术及其在新药发现中的应用 1 1 土壤中微生物的多样性 3 2 环境基因组技术 3 3 土壤DNA的分离提取 4 4 土壤DNA文库的构建 6 5 土壤环境基因组文库的筛选方法 7 文2：Ajax技术及其在WebGIS中的应用 8 2 基于Ajax引擎的Web应用体系结构 9 3 Ajax的优点 10 4 Ajax在WebGIS中的应用 11 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 土壤环境基因组技术及其在新药发现中的应用 文1：土壤环境基因组技术及其在新药发现中的应用 Soil metagenomics and its application for new drug discovery ABSTRACT Soil is the most important habitat for microbes. Soil microbes are of coiderable diveity. However, only about 1% of soil microbes are cultivable with traditional techniques, othe are all uncultured microorganisms. The gene of uncultured microorganisms can be cloned to vecto and expressed in host by soil metagenomics. Highly diveified metabolites can be obtained than those obtained from cultured microorganisms, which pave the way of discovering lead compounds with novel structure or even new drugs. In this review, the idea and method of cotructing a soil DNA library by metagenomics is WORDS Drug discovery; Metagenomics; Asyet uncultured microorganisms; Soil DNA library; Bioactive substance 自从1928年Alexander Fleming发现点青霉中存在抗菌物质后，在微生物次级代谢产物中寻找药物就一直是药物发现的热点之一。传统的微生物药物筛选方法是从环境中分离培养微生物，并对纯培养进行发酵以获得特定生理条件下的次级代谢产物，最后对产物中的活性成分进行分离、纯化和表征，以获得有临床价值的先导化合物。在经历了大规模抗生素筛选的黄金时代以后，微生物药物发现进入低速 发展 阶段。抗生素滥用导致的耐药性问题使得人们努力从微生物中寻找新的抗生素，尤其是具有新结构的抗生素先导化合物。然而，传统分离培养方法的局限性，从环境中分离得到新类群越来越困难，即使分离得到的微生物，菌株的排重问题也难以得到解决。传统技术越来越难以增加微生物次级代谢产物的多样性，也不能满足高通量筛选的需求。决定微生物次级代谢产物多样性的因素主要有：待筛选物种数量及其多样化程度；物种的新颖性及其产生新次级代谢产物的潜力［1］。天然产物的复杂性和新颖性永远超乎人们的想象， 自然 环境中存在的微生物多样性也远远超出人们的常识。实际上，可培养的微生物只占整个微生物类群很小的一部分，未被纯培养微生物(asyet uncultured microorganism)蕴藏着一大批未开发的药物资源。通过环境基因组(metagenomics)的方法，即从土壤样品中提取总DNA，纯化，部分降解，把酶切片断放入载体中，在诸如大肠埃希菌等容易发酵的微生物中表达。人们已开始探索这一未知领域，并报道了由新颖序列编码的表达酶活性和抗生素活性的克隆［2］ 1 土壤中微生物的多样性 土壤微生物是最有价值的天然产物源泉之一，它们提供了许多 工业 上十分重要的抗生素以及生物催化剂。芽孢杆菌、丝状真菌、放线菌以及粘细菌都有惊人的产生多样化次级代谢产物的能力。Hammond估计地球上的微生物物种多达16×109，广泛分布于各种生态系统中［3］，其中，土壤无论从微生物数量和种类上都是首屈一指的生境。运用重组动力学的方法，Tovik等估计1克土壤中约有大于4000种不同的微生物［