整合素β1在体外培养牛眼小梁细胞中的表达医学.docVIP

整合素β1在体外培养牛眼小梁细胞中的表达医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：整合素β1在体外培养牛眼小梁细胞中的表达医学 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 4 文2：关于整合素β1在体外培养牛眼小梁细胞中的表达 6 1 材料与方法 7 2 结果 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 整合素β1在体外培养牛眼小梁细胞中的表达医学 文1：整合素β1在体外培养牛眼小梁细胞中的表达医学 【Abstract】 Objective To study the expression and significance of integrinβ1 in cultured bovine trabecular meshwork(BTM) cells Methods BTM cells were primarily cultured and subcultured, and rendered identification. The third generation BTM cells were rendered rabbit AntiIntegrin β1, stained with antiintegrinβ1 by FITCIgG and HRP BTM cells was observed by inverted microscope, and taked Making use of immunofluorescence and immunohistochemistry, we observed positive staining of integrinβ1 in cultured 　BIM　 Cultured bovine trabecular meshwork cells express integrinβ1，and can be used as good experimental base for researching etiology of POAG in the future. 【Key words】 trabecular meshwork,integrin,extracellular matrix;glaucoma 整合素（integrin）是一类细胞膜表面的糖蛋白受体家族分子, 在人体各种组织中表达, 它介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)之间的反应, 参与细胞信号传递、细胞黏附、迁移, 控制细胞分化、增殖以及凋亡等各种生理过程。人眼房水外流阻力主要存在于小梁网组织, 小梁网内环境的稳定是保持房水外流通畅、维持正常眼内压的关键因素。随着分子生物学等相关学科的发展, 人们观察到小梁网表达多种整合素亚单位, 并对其之间的关系进行了深入研究。目前牛小梁细胞体外培养技术已趋成熟，能为试验研究提供丰富的细胞，是研究人小梁细胞生物学功能的良好替代方法。我们研究体外培养牛小梁细胞表面整合素表达，探讨其在青光眼发病机制中的意义。 1 材料与方法 牛眼小梁细胞培养及细胞鉴定 采用杨新光等培养方法及本实验室既往方法［1］, 新鲜牛眼常规消毒后, 截取角巩膜缘后5 mm距离，去除虹膜及晶状体等眼前节部分, 在体视显微镜下辨别Schawlbe线以及巩膜突, 以显微镊轻轻撕取乳白色疏松网状小梁组织, 移入培养瓶于37℃培养箱静置～1 h，待组织块贴壁后加入高糖DMEM培养液［含15%胎牛血清,10 mmol/L Hepes（购自Sigma公司）,青霉素、链霉素各100　U/ L， μg/ml两性霉素B，2　mmol/L谷氨酰胺,于恒温培养箱(37℃, 5%CO2，饱和湿度)培养, 每5 d更换培养液, 倒置荧光显微镜观察细胞生长特性、形态特征, 从形态学角度鉴定细胞。%胰酶和%EDTA混合液消化传代。取第四代细胞接种于预置消毒盖玻片（多聚赖氨酸包被）的24孔培养板(Costar公司产品)中。 细胞生长近融合期时, mol/LPBS(pH　)缓冲液冲洗, 4%多聚甲醛溶液固定, 室温干燥备用。免疫荧光法行神经元特异性烯醇化酶(E)及Ⅷ因子相关抗原染色（一抗兔抗E，二抗羊抗兔FITCIgG 均购自博士德公司）, 激光共聚焦显微镜下观察以鉴定小梁细胞组织来源。 实验方法 免疫荧光法：取已固定细胞玻片, PBS振洗5 min×3次, 滴加羊血清工作液37℃20 min，后甩干，加兔多克隆抗体antiintegrinβ1 (武汉博士德产品, 工作浓度1：200, mol/LPBS稀释，4℃过夜,