己酮可可碱对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的干预作用.docVIP

己酮可可碱对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的干预作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：己酮可可碱对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的干预作用 1 1材料和方法 2 文2：K252a对内毒素诱导急性肺损伤大鼠的保护作用 6 1 材料和方法 7 2 结 果 8 3 讨 论 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 己酮可可碱对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的干预作用 文1：己酮可可碱对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的干预作用 急性肺损伤(acute lung injury, ALI)/急性呼吸窘迫综合征(acute respirator distress syndrome, ARDS)是多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS)在肺部的局部体现［1］. 己酮可可碱(Pentoxifylline, PTX)作为血管活性药物已用于治疗血管功能不全性疾病，近年的研究还发现PTX具有抑制中性粒细胞、单核细胞聚集，保护血管内皮细胞的作用而将其用于炎症性疾病的治疗，但具体机制尚未阐明［2-3］. 我们采用在鼠尾静脉注射内毒素(lipopolysaccharide, LPS)的方法复制大鼠ALI模型，通过观察PTX对ALI 大鼠模型病理生理以及生化等项指标的影响，旨在进一步探讨PTX对ALI的防治作用及可能的机制. 1材料和方法 材料 SD大鼠72只，体质量250～300 g(河南省动物实验中心提供)；PTX，LPS，甲苯Triton X100闪烁液(美国Sigma公司)；超氧化物歧化酶（SOD）, 丙二醛（MDA）, 一氧化碳（NO）及诱生性一氧化氮合成酶（iNOS）检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)；BP211D型 电子 天平(德国Sartorius公司)；MPF4型荧光分光光度计，液体闪烁计数仪(日本日立公司)；752 型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)；便携式ABL500血气分析仪(丹麦雷度公司)；胰蛋白酶，牛血清白蛋白，DMEM高糖培养基，小牛血清及马血清(美国Gibco公司) 方法 模型建立与动物分组 按 文献 ［2］的方法建立大鼠模型. 将大鼠随机分为3组：对照组，实验组和治疗组，每组动物24只. 采用盐酸氯胺酮50 mg/kg腹腔注射麻醉，给予对照组大鼠尾静脉注射生理盐水，实验组大鼠尾静脉注射LPS，剂量为4 mg/kg，治疗组大鼠尾静脉在注射LPS前1 h由腹腔注射 mol/L PTX 10 mg/kg. 确认实验组复制ALI模型成功之后，即刻给予PTX 10 mg/kg腹腔注射，间隔1 h重复给药，连续5次；其余两组大鼠与实验组同样时间间隔给予腹腔注射等容积的生理盐水. 血气及肺水肿参数测定 注射LPS 6 h后，放血活杀动物之前，经由左心室采血3 mL，2 mL用于便携式血气分析仪做血气分析，其余1 mL血液分离血清后置-20℃冰箱冷冻待测定. 活杀动物快速肺组织取材，常规包埋，切片进行HE染色. 取材完毕，切开大鼠气管，经气管插入12号针头行肺泡灌洗，每次1 mL，总量为5 mL，记录收集的肺泡灌洗液量，并于显微镜下计数肺泡灌洗液中细胞总数及中性粒细胞，巨噬细胞数并 计算 所占百分比. 测定各组动脉血气指标、肺系数、肺含水量、肺通透性指数；蛋白含量测定按Lowry法进行，使用752型分光光度计比色(波长700 nm)，将各样品A值与标准曲线对比后，计算蛋白含量并以大鼠肺泡灌洗液上清液蛋白含量比血浆蛋白含量得到肺通透指数(lung penetration index, LPI) . 血液及组织中NO, iNOS, SOD, MDA的测定 大鼠血中NO含量测定按试剂操作说明书进行. 注射LPS 6 h后迅速处死大鼠，取出一定量的肺组织，约2 mm×2 mm×2 mm体积大小组织，按15%(W/V)比例加入预冷的Buffer A，在冰浴中匀浆器匀浆，4℃，20 000 g离心30 min，收集上清液即为NOS提取液，置-20℃保存. 采用Lowry法测定iNOS提取液蛋白含量. SOD，MDA检测按试剂盒操作说明书进行. 统计学处理： 测定结果以x±s表示，应用SPSS 统计软件进行统计分析，组间比较采用方差齐性检验、单因素方差分析(Oneway ANOVA)，数据组间多重比较采用LSDt检验. 显著性水准α定为. 2结果 大鼠急性肺损伤模型评价 SD大鼠静脉注射LPS后，可见大鼠呼吸加快，常规肺组织大体切片显微镜观察结果显示符合ALI的诊断标准［3］，表明模型制作成功，可用于实验研究（图1） 对大鼠血清各项血气指标以及巨噬细