实验1聚两烯酰胺凝胶电泳法.docVIP

PAGE PAGE 1 实验1 SDS-聚两烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质分子量 一、目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量的原理与方法。 二、原理 天然蛋白质在电场中泳动的迁移率主要取决于所带电荷的多少、分子量的大小以及分子的形状等因素。1967年Shapiro等人发现，在有阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate简称SDS)存在时，蛋白质的迁移率则主要取决于它的分子量的大小，而与其所带电荷的多少以及形状无关。1969年Weber和Osborn用此法测定出了约40种蛋日质的迁移率，结果证明，蛋白质的迁移率和其分子量的对数呈直线关系： 1gMW＝－bm十k 式中MW为分子量；m为迁移率；b为斜率；k为常数。 实验证明，分子量在12 000～200 000之间的蛋白质，用此法测得的分子量，与用其他方法测得的相比，误差一般在±10%以内，重复性高。此方法还具有设备简单、样品用量甚微、操作方便等优点，现已成为测定某些蛋白质分子量的常用方法。 应用此法测分子量，是将几种已知分子量的标准蛋白混合物与待测样品同时进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，获得各样品的相对迁移率。以标准蛋白质的分子量为纵坐标，相对迁移率为横坐标，在半对