各样品中粗蛋白质的测定方法.docVIP

各样品中粗蛋白质的测定方法 本试验中各样品粗蛋白的测定均采用凯氏定氮法。 1 试剂及配制 （1）浓硫酸。化学纯。 （2）硫酸铜。化学纯。 （3）硫酸钠。化学纯。 （4）10％硫酸铜。10g硫酸铜（化学纯）溶于100ml水中。 （5）400g.l-1氢氧化钠溶液。40g氢氧化钠（分析纯）溶于100ml水中。 （6）20 g.l-1硼酸溶液。 （7）盐酸标准滴定溶液。邻苯二甲酸氢钾法标定。 （8）混合指示剂。甲基红1 g.l-1乙醇溶液于溴甲酚绿5g.l （9）蔗糖。分析纯。 2 试样的选取和制备 剩料和粪样及饲料样品风干后粉碎至40目，密封保存。尿样用干净的5ml移液管吸取，取样前把尿样搅匀。 3 测定步骤 3.1 试样的消化 称取约0.5g试样，准确至0.0002g，无损地放入凯氏烧瓶中，加入硫酸铜0.3g，无水硫酸钠5g，与试样混合均匀，再加入浓硫酸15ml和2粒玻璃珠；尿样取5ml，用5ml移液管量取，无损转移到凯氏烧瓶中，然后加入10％硫酸铜2ml，浓硫酸10ml和2粒玻璃珠，混匀。把凯氏烧瓶放在通风柜里的电炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加大火力（约400℃ 试剂空白测定：称取蔗糖0.5g代替样品，按上述步骤进行消化。 3.2 氨的蒸馏 采用半微量水蒸汽蒸馏法。 将试样消煮液冷却，加水20ml，移入100ml容量瓶中，冷却后定容，摇匀，作为试样分解液。取20ml硼酸溶