实验11 动物肝脏中DAN的提取及含量测定.docVIP

PAGE PAGE 2 实验11 动物肝脏中DAN的提取及含量测定 原理： 核酸是构成生物体最主要的组成成份之一，是遗传信息的载体；和蛋白质的生物合成密切有关。核酸在生物的遗传变异，生长繁殖及分化发育等方面都起着决定性的作用。核酸的研究对于肿瘤的发生和治疗也有重要意义。核酸的提取是研究核酸的结构，功能和理化性质的前提。提取核酸的方法较多，目的不同可采用不同的方法，如为了得到高聚程度的具有生物活性的核酸可用SDS（十二烷基硫酸钠）法，酚法或氯仿—异戊醇法除去蛋白质。如制品有些变性，降解也不成问题，可用浓盐法。 本实验利用在浓盐（1—2M NaCI）中，脱氧核糖核蛋白（DNA）的溶解度很大，核糖核蛋白（RNA）的溶解度很小，而在稀盐（0.14M NaCI）中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白溶解度很大，因此可用不同浓度的氯化钠溶液，使两者分离。同时利用SDS使DAN与蛋白质分开，利用氯仿—异戊醇法除去蛋白质，使DNA溶于浓盐溶液中。再用高浓度的乙醇使DNA纤维析出。 所得DNA为粗制品。确定其含量及纯度可应用紫外吸收法及其他化学方法。本实验拟用“二胺法”对产品进行鉴定。 DNA经酸解生成嘧啶、嘌呤、磷酸及脱氧核糖，脱氧核糖在酸性条件下脱水生成W一羟基一γ一酮基戊醛。后者与二苯胺作用显示蓝色，在660nm有最大吸收值。待测样品DNA浓度在50—500ug/ml ，光密度读