实验12分子筛凝胶过滤分离血红蛋白和核黄素.docVIP

PAGE PAGE 1 实验12 分子筛凝胶过滤分离血红蛋白和核黄素 原理 分子筛指的是一些多孔介质。当含有不同大小分子的混合物流经这一介质时，小分子物质能进入介质内部孔隙，而大分子物质则被排斥在介质之外，从而达到分离的目的，这种作用被称为“分子筛效应”。具有这种效应的物质很多，其中效果较好的有葡聚糖凝胶，其主要原理见附录四。 本实验是分子筛凝胶过滤的初步训练，采用Sephadex G—25或G—50，以磷酸缓冲液为洗脱剂。层析分离大分子的血红蛋白和小分子的核黄素。 试剂和仪器 葡聚糖凝胶：Sephadex G—25或G—50。 样品：血红蛋白和核黄素混合溶液。 洗脱液：0.05mol/L、pH4.3磷酸缓冲液 恒流泵。 自动部分收集器。 操作 凝胶的处理 溶涨与浮选：将凝胶放入过量的水中浸泡六小时（沸水浴中为二小时）。浸泡后搅动凝胶再静置，待凝胶沉积后，用倾泌法去除上层清细粒悬液，如此反复数次。 平衡：将浸泡后的凝胶抽干，用十倍量的洗脱液处理约一个小时，搅拌后继续去除上层细浮液。 装柱：将层析柱垂直装好，自柱底端出口皮管内用重力法通入溶液以去除出口管内和砂芯底部的气泡，待气泡排除后，使溶液在底端留至约1cm高即行关闭，将处理好的凝胶在烧杯内用约一倍的溶液搅调成悬浮液，自柱顶部沿管内壁缓缓加入柱中。待底部凝胶沉积至1~2cm时，缓缓打开底端出口管，随之继续添加凝胶悬浮液直至