取小鼠脑组织.pdfVIP

丁香园上面总结的方法，排版有点乱。 其实过程与大鼠近似，我的经验是： 1. 材料准备；大剪刀、眼科剪、眼科镊、大镊子、滤纸、竹签等； 2. 步骤：处死小鼠，取头颅； 剪开皮肤，漏出颅骨； 用大尖镊子夹住两侧眼眶，用眼科剪稍剪除颅骨中线； 再用眼科镊夹住颅骨从内向外夹，从下向上逐步去除颅骨； 当全脑露出时，再用眼科镊去除脑膜和血管； 然后用竹签从嗅球处向下取出全脑，即可。 3. 注意事项：用力轻柔，否则容易弄破脑部； 用剪刀剪颅骨时，一定要贴壁向上剪，否则容易剪破脑部； 去除脑膜时，不能硬拉，否则容易弄破大脑； 取出全脑时应把头顶朝下，用竹签轻轻取出，离桌面也不要太远、高； 若留病理，建议一定要取完整无损的大脑。 做免疫组化的话，稍微麻烦一点儿，因为脑组织含水量多，要固定的好，就需要 先灌注。 先麻醉小鼠 剪开胸腔，找到心脏，从心尖入针，剪开右心耳 先用生理盐水灌注直到从心耳流出来的水清亮了 再改用固定液（一般是 4%多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬 小鼠只需要用注射器就行了， 我做的 25～35g 的小鼠一般用 50mLNS+30mL多聚甲 醛。具体步骤：常规麻醉小鼠，将其固定，用剪刀剪开胸部皮肤，暴露出皮下组 织，剪开时注意钝性分离，以免误伤。然后用镊子提起剑突，用剪刀剪开胸腔， 剪断两侧肋骨， 暴露整个胸腔， 小心误伤肺及心脏、 大血管。用镊子撕开心包膜， 暴露心脏， 用眼科剪剪开右心耳， 然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入 左心室，注射，注射时小心针头滑脱。 生理盐水灌流至肺和肝的颜色都变成灰白 色即可。然后用多聚甲醛灌流， 针孔最好是同一个， 多聚灌流时小鼠四肢会抽搐， 待抽搐结束，小鼠僵硬即可。取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅，用剪刀在小鼠 头颅中间皮肤剪一刀， 将两边皮肤向下翻用手捏住， 暴露整个颅骨， 用眼科剪从 脊髓端插入椎孔， 沿着颅正中线剪开颅骨， 注意剪刀向上翘一些， 以免误伤脑组 织，剪开后用弯眼科镊分离颅骨，小心分离，直至暴露整个大脑，然后用弯镊伸 入颅底离断颅底神经， 就可以取出整个脑子了。 放多聚里固定 24h 后包埋切片即 可。 具体操作如下： 实验操作步骤： 1) 小鼠称重，以每克小鼠 0.0025ml 4%戊巴比妥钠剂量的实施腹腔麻醉。也 可以用 10%的水合氯醛， 3-5ul/g 腹腔注射麻醉。 2) 将麻醉的小鼠仰放在操作台上，去毛。 3) 解剖小鼠，暴露心脏。 4) 找到心尖部， 左手用镊子提起心尖部， 右手或左手将灌流针刺破心尖部进 针约 0.5cm （最好是用小点的针头，用 止血钳 固定针尖，剪开右心耳。 5) 将灌流器的导管部开口放到生理盐水中里， 打开灌流器灌流， 直到从右心 耳流出的液体为无色，同时小鼠肝脏色淡，肠管肿胀为止，停止灌流。没有灌流 器的用注射器或者吊瓶都可以。 6) 将灌流器的导管小心的移至 4%多聚甲醛或 2.5%戊二醛中，注意不要产生 气泡，开始灌流。此时如果看到小鼠四肢突然紧张，尾部卷曲，说明达到固定效 果。 7) 灌流大约 5 分钟，灌流液用量约 150 毫升左右结束。 （小鼠的用量没这么 多） 8 ） 取材。取实验所需的标本。 9 ） 将取出的材料放到事先准备的多聚甲醛 （戊二醛）中固定 2—— 4 小时后 移至 30%蔗糖中 4 度冰箱保存过夜。 我们实验室鼠脑冰冻切片采用 4%的多聚甲醛固定，小鼠直接灌注 saline20ml ， 4%多聚甲醛 20ml 经左心室固定然后取材在 4 度 4%多聚甲醛后固定 4-6h ，浸 20%-30%糖沉底， 就可以切片， 切片首先需要冰冻切片机， 我们的 leica1900 的， 不知道 lz 那里有没有这个机子， 还有一种原始的自己刷冻台的那种， 比较麻烦， 切片