三氧化二砷对恶性B淋巴瘤细胞Raji的抑制作用医学.docVIP

三氧化二砷对恶性B淋巴瘤细胞Raji的抑制作用医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：三氧化二砷对恶性B淋巴瘤细胞Raji的抑制作用医学 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 4 文2：三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用 5 1 材料与方法 5 2 结 果 7 3 讨 论 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 三氧化二砷对恶性B淋巴瘤细胞Raji的抑制作用医学 文1：三氧化二砷对恶性B淋巴瘤细胞Raji的抑制作用医学 【Abstract】 Objective To explore the inhibitory effect and cycle defect of aenic trioxide on human B lymphoma cells. Method MTT method was used to observe the growth inhibitory rate of Raji cells treated with different dose of AS2O3 in vitro. The expression level of p21 and cell cycle was measured by flow cytometry in Raji cells treated with different dose of AS2O3 72h. Results All the treated cells showed significantly decreased proliferation compared with control cells in vitro as detected by MTT method. The cell cycle of Raji cells treated with AS2O3 was arrested in G0/G1 phase and AS2O3 can improve the expression of p21. Conclusion AS2O3 can arrest the cell cycle of Raji cells in G0/G1 phase. The possible mechanism may be through up-regulation of p21 expression. 【Key words】P21WAF1/CIP1 Aenic trioxide Cell cycl 三氧化二砷是中药砒霜的主要成分，近年来因在 治疗 急性早幼粒细胞性白血病方面取得了满意疗效而引起广泛的关注。研究表明，其作用机制可能是三氧化二砷影响了肿瘤细胞周期的 发展 ，诱导细胞发生凋亡[1]。本实验以Raji细胞为研究对象，观察其是否能引起细胞周期阻滞及对周期相关基因表达的影响。 1 材料与方法 材料 (1)细胞株:人B淋巴瘤细胞株Raji由河北医科大学第四 医院 科研中心保存。（2）药物：三氧化二砷为Sigma公司产品。（3）主要试剂：RPMI1640培养基购自美国GIBCO公司，胎牛血清购自杭州四季青公司，P21WAF1/CIP1鼠抗人单抗为北京中杉金桥生物公司产品。 方法 细胞培养 Raji细胞用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RPMI1640完全培养基，置于37℃，5%CO2 饱和湿度条件下培养箱中培养，每2～3d换液一次，实验选用对数生长期细胞，设实验组与对照组，实验组分别用4、2、1μmol/l AS2O3处理细胞，未加药组为对照组。 细胞生长抑制率的测定 采用MTT比色法进行检测。取对数生长期的细胞，调整细胞浓度为×105 /ml。取96孔板数个，每孔加入上述细胞悬液100μl，再分别加入AS2O3的贮存液，使AS2O3的终浓度分别为0、1、2、4μmol/l。每种药物浓度为一组，每组设6个平行孔，根据实验设计继续培养24、48、72h后，每孔加入10μlMTT，在相同条件下再继续培养4h后取出，离心后吸去上清夜，每孔加入100μl二甲基亚砜，振荡10～15分钟，20分钟内在酶标仪上读取波长为570nm的吸光度A值，各浓度时间点取平均值，根据下列公式 计算 细胞生长抑制率：细胞生长抑制率（%）=（对照组A值－实验组A值）/对照组A值×100% 流式细胞仪检测细胞周期变化 收集不同浓度AS2O3处理的Raji细胞，用PBS清洗2次再将细胞沉淀充分混匀，用70%的冷乙醇4℃固定过夜，然后离心去除固定液，PBS清洗一次，RNA酶37℃处理1小时，与PI室温反应10min，用流式细胞仪测