苏木醇A对顺铂所致小鼠肾损伤中Nrf-2作用机制的研究.docVIP

PAGE PAGE 21 苏木醇A对顺铂所致小鼠肾损伤中Nrf-2作用机制的研究 目的：采用人为手段抑制小鼠肾足细胞中Nrf-2的表达，研究在Nrf-2表达抑制的小鼠肾足细胞在顺铂和苏木醇A联合用药后增殖和凋亡的变化，同时检测上述细胞中Nrf-2和HO-1蛋白的表达，同时检测其对存活情况，旨在了解苏木醇A对顺铂引起的肾足细胞损伤的发生和发展过程中的作用机制，为探索新的靶向治疗策略提供实验依据。 方法：将含有Nrf-2 siRNA的片段克隆入慢病毒载体Pglv3-GFP中，随后将该质粒载体转染293T细胞，包装出含有Nrf-2 siRNA的病毒病并将之感染小鼠肾足细胞，构建Nrf-2沉默表达的小鼠肾足细胞系。将实验分为两组，对照组为正常小鼠肾足细胞加入5 μM DDP和2 μM SPNA，实验组为Nrf-2 siRNA小鼠肾足细胞加入5 μM DDP和2 μM SPNA，每组设3个平行孔。MTT法检测各组细胞的存活率，流式细胞术检测凋亡情况，western blot法检测各组细胞中Nrf-2和HO-1蛋白的表达。 结果：MTT法检测结果表明，对照组正常小鼠肾足细胞的存活率为73.5%， Nrf-2 siRNA小鼠肾足细胞的存活率为46.7%，明显低于对照组（P0.01）。流式细胞术检测结果表明，对照组小鼠肾足细胞的凋亡率为12.7%，Nrf-2 siRNA小鼠肾足细胞的存活率