普通PCR与TDPCR在临床医学科研中应用价值的比较临床医学.docVIP

普通PCR与TDPCR在临床医学科研中应用价值的比较临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：普通PCR与TDPCR在临床医学科研中应用价值的比较临床医学 1 1 材料与方法 3 1．5 PCR 程序 4 2 结果 4 3 讨论 5 文2：银染PCR医学 6 1材料和方法 7 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 普通PCR与TDPCR在临床医学科研中应用价值的比较临床医学 文1：普通PCR与TDPCR在临床医学科研中应用价值的比较临床医学 Abstract： Objective To compare the ordinary polymerase chain reaction (PCR) and touchdown (TD)PCR in clinical medical research. Methods We used genomic DNA from human peripheral blood as templates and designed three pai of prime of VHL gene three exo. On the basis of the principle of PCR and TDPCR, we designed the programs, including the three exo. We chose the better reaction conditio through the PCR tests. The same programs were carried out on three fragments. The PCR products were detected by gel agarose electrophoresis. We analyzed the difference between the two methods by sequencing purified PCR products. Results It was indicated that TDPCR was more specific and effective than ordinary PCR, according to electrophoresis detection and sequencing analysis. Conclusion TDPCR, which acts as a rapid and reliable method, is more efficient than ordinary PCR for clinical gene mutation screening. Key words： gene; polymerase chain reaction; touchdown polymerase chain reaction 自从20世纪80年代中期以来，聚合酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)作为一种体外扩增DNA的方法，在分子生物学、法医学及一些人类基因疾病诊断等方面起到越来越重要的作用。PCR所具有的3个突出的特点（即选择性，特异性和快速性），使得DNA的克隆和操作变得十分简单。目前在一些临床基因突变筛查研究中，PCR作为基本实验手段，得到了广泛的应用,尽管如此，许多PCR实验中不但经常出现假阳性，而且实验结果往往并不太令人满意，也会造成无PCR产物，或电泳中出现大量非特异性二聚体条带。降落聚合酶链反应(Touchdown PCR，TDPCR)，最初是用于克服PCR中的假引发，作为一种行之有效的DNA体外扩增方法，在许多普通PCR无产物的基因扩增，都采用TDPCR，因此我们在VHL基因突变筛查中使用了普通PCR和TDPCR两种方法，并同时使用了TaKaRa Taq Hs进行了实验，期望能够得到良好的实验结果及建立TDPCR方法。 1 材料与方法 1．1 PCR扩增引物及模板 引物设计 参考 文献 ［1］，由大连宝生物工程有限公司合成。两组实验均以1例健康人类外周血基因组DNA为模板，外周血DNA提取采用大连宝生物工程有限公司D9081血液基因组提取试剂盒,严格按照说明书提取基因组DNA。 1．2 PCR扩增条件 50 μl 反应体系中包括：大连宝生物工程有限公司DR028A PCR混合浓缩试剂（Premix Taq Hot Start Veion）25 μl，100 μmol/L 上下游引物各 μl，基因组DNA100～200 ng，灭菌超纯水 μl。 1．3 PCR扩