大系统理论煤矿综合自动化系统研究报告.docx

个人资料整理 仅限学习使用 附录二 常用的培育基及试剂 1、糖发酵管 成分： 牛肉膏 5g 磷酸氢二钠 2g 蛋白胨 10g 溴麝香草安分蓝深液 12ml 氯化钠 3g 蒸馏水 1000ml pH7。4 制法： 1）葡萄糖发酵管按上述成分派好后，按 0.5%加入葡萄糖，分装有一个倒置小管的小试管内，高压灭菌 121℃15min。 2）其余各样糖发酵管可按上述成分派好后，分装每瓶 100ml, 高压灭菌 121℃15min。另将各样糖类分别配好 10%溶液，同时高压灭菌。将糖溶液 5ml 加入 100ml 培育基内以无菌操作分装小试管。 实验方法：从琼脂斜面上挑取小量培育物接种，于 36±1℃培育，一观察看 2-3 天，缓慢反响应需察看 14-30 天。 附注：蔗粮不纯，加热后会自行水解者，应采纳过滤法除菌。 2、ONPG增减基 成分： 邻基粉 β-D- 半乳糖苷 ONPG） 60mg O-Nitropheny1- β-D-galactopyranoside  ） 0．磷酸钠缓冲液  10ml 1%蛋白胨）  30ml 分装  制法：将 ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以滤过法除菌， 10×75mm试管，每管 0.5ml ，用橡皮塞塞紧。 实验方法：自琼脂斜面上挑取培育物，满环接种，于 36±1℃ 培育 1-3h 和 24h 察看结果。若有 β- 半乳糖苷酶产生则于 1-3h 变黄 色，如无此酶则 24h 不变色。 3、缓冲葡萄糖蛋白胨水 MR和 VP实验用） 成分：磷酸氢二钾 5g 葡萄糖 5g 多胨 7g 蒸馏水 1000ml 制法：熔解后校订 pH，分装试管每管 1ml, 高压灭菌 121℃ 个人资料整理 仅限学习使用 15min。 甲基红 MR）实验：自琼脂斜面挑取少量培育物接种本培育基 中，放 36±1℃培育 2-5 天，哈夫尼亚菌则应在 22-25 ℃培育。滴加甲基红试剂一滴，马上察看结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲 基红试剂配法：甲基工 10mg溶于 30ml95%酒精中，而后加入 20ml 蒸馏水。 V-P 实验：用琼脂培育物接种本培育基中，放 36±1℃培育 2-4 天。哈夫尼亚菌则应在 22-25 ℃培育。加入 6%。A 萘酒精溶液 和 40%氢氧化钾溶液 0.2ml ，充足振摇试管，察看结果。阳性反响立 刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在 36±1℃4h 再进行观 察。 4、西蒙氏柠檬酸盐培育基 成分： 氯化钠 5G 柠檬酸钠 5g 硫酸镁 MgS04 7H20） 琼脂 20g 磷酸二氢铵 1g 蒸馏水 1000ml 磷酸氢二钾 1g0.2% 溴麝香草安分蓝溶液 40ml 制法：先将盐类溶解于内，校订 pH再加琼脂，加热熔解而后加入指示剂，混淆平均后分装试管，高压灭菌 121℃15min，放成斜面。 实验方法：挑取少量琼脂增物接种，于 36±1℃培育 4 天，每 天察看结果。阳性者斜面上有菌落生长，培育基从绿色转为蓝色。 5、丙二酸钠培育基 成分： 酵母浸膏 磷酸氢二钾 磷酸二氢钾  1g  0.2%  氯化钠 2g 溴麝香草酚蓝溶液 蒸馏水 1000ml  12ml 制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水 , 分装每瓶 100ml 分别加入各样氨基酸。赖氨酸和鸟氨酸按 0.5%加入， dl- 氨基酸按 1%加 个人资料整理 仅限学习使用 入。再行校订 pH至 6.8 。比较培育基不加氨基酸。分装于灭菌的小式管内管每 0.5ml ，上边滴加一层液体白腊，高压灭菌 115℃ 10min。 实验方法：从琼脂斜面上挑取培育物接种，于 36±℃ 18-24h，察看结果。氨基酸脱羧酶阳性者因为产碱，培育基应呈紫色。阴性 者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使增基变成黄色。比较管应为黄色。 9、蛋白胨水  靛基质实验用） 成分： 蛋白胨 或胰蛋白胨） 氯化钠 5g  20g  蒸馏水  1000ml 制法：按上述成分派制，分装小试管，高温灭菌15min。  121℃± 靛基质试剂： 1）柯凡克试剂  将 5g 对二甲氨基苯甲醛溶解于  75ml  戊醇中 而后缓慢加入浓盐酸 25ml。 2）殴- 波试剂 将 1g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 95ml，而后缓慢加入浓盐酸 25ml。  95%酒精 实验方法：挑取小量培育物接种，在 36±1℃培育 1-2 天，必需时可培育 4-5 天。加入柯凡克试剂 0.5ml ，轻摇试管，阳性者于试剂层呈红色。或加入殴 - 波试剂约 0.5ml ，沿管壁流下，覆盖于培育液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。 附注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌咱判定后方可使用。 10、尿素琼脂 成分： 蛋白胨 1g 0.4