CpGODN对哮喘气道MMP临床医学.docVIP

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CpGODN对哮喘气道MMP临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1:CpGODN对哮喘气道MMP临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2:福莫特罗对哮喘小鼠气道杯状细胞增生及粘蛋白MUC5acmRNA表达的影响临床医学 5 1 材料与方法 6 2 结 果 9 3 讨 论 10 参考文摘引言: 12 原创性声明(模板) 13 文章致谢(模板) 14 正文 CpGODN对哮喘气道MMP临床医学 文1:CpGODN对哮喘气道MMP临床医学 现在研究认为哮喘是一种气道慢性炎症性疾病,反复炎症刺激可引起组织损伤及后续的组织结构改变即气道重塑[1]。炎症细胞及局部结构细胞如平滑肌细胞、上皮细胞等均可分泌大量介质,诱导细胞外基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达,这些表达在哮喘的慢性病程中起重要作用[2]。含非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤的寡核苷酸链(CpGoligodeoxynuleotides, CpG ODN)能够刺激机体产生多种细胞因子及表面粘附分子,诱导细胞及体液免疫,在 治疗 免疫性疾病、肿瘤及疫苗研究等方面有独特价值。本实验旨在利用卵蛋白致敏激发的小鼠慢性哮喘模型,探讨CpG ODN对气道重塑有无抑制作用。 1 材料与方法 实验动物及试剂清洁级BALB/c小鼠28只, 7周龄,体重16~20g,购于扬州大学比较医学中心[许可证号:SCXK(苏)]。主要试剂包括鸡卵清蛋白(ovalbumin, OVA)(Sigma公司Ⅱ级),CpG ODN(5′TCCATGACGTTCCTGACGTT3′)(上海生物工程技术服务有限公司),兔抗基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase,MMP9)多克隆抗体(Santa Cruz公司),二抗试剂盒,3,3二氨基苯联胺(DAB),苏木素(北京中杉生物技术有限公司) 实验方法 动物分组 将28只小鼠随机分为哮喘组、CpG ODN组、地塞米松组和对照组4组,每组7只。 哮喘动物模型制备 小鼠于我校动物试验中心[使用许可证号:SYXK(苏)]适应性饲养,温度22~27℃,湿度40%,灯光照明明暗各12h。1周后,采用卵蛋白致敏和激发建立哮喘小鼠模型[3]。哮喘组、CpG ODN组、地塞米松组分别于第0、14天腹腔注射OVA10μg加氢氧化铝2mg的生理盐水悬液,同时CpG ODN组给予CpG ODN100μg。第15天开始以%OVA雾化激发,30min#12539;d-1,3d#12539;周-1,共6周;地塞米松组每次激发前1h予%地塞米松雾化10min;对照组全部以生理盐水代替。末次刺激后24h处死动物。 取材 将动物颈椎脱臼处死,迅速打开胸腔,取出左肺投入10%中性福尔马林溶液中固定24h。肺标本严格于垂直位石蜡包埋,切片,片厚5μm。 光镜观察及气道形态学测定 行HE染色,光镜观察肺组织病 理学 改变(观察倍数10×40):取5个完整的支气管横断面,且气管最小径/最大径≥。参照 文献 [4]应用ImagePro Plus 图像分析软件测定支气管基底膜周径(Pbm)、上皮黏膜层面积(WAmuc)、平滑肌面积(WAmus)、气管内壁面积(WAi),并用Pbm标准化,分别以WAmuc/Pbm、WAmus/Pbm、WAi/Pbm表示气道重构程度。 免疫组化方法(SABC法)测定 一抗选用兔抗大鼠MMP9多克隆抗体,稀释度为1∶80。用二抗试剂盒进行操作,操作步骤按试剂盒说明书进行,DAB显色,苏木素轻度复染,光镜观察。阴性对照以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗而其他条件均相同,用ImagePro Plus 软件采取图灰度值行图像分析。 统计学处理采用统计软件,数据以x-±s表示,进行t检验、单因素方差分析,两两比较用q检验。 2 结 果 肺组织病 理学 改变及图像分析光镜下观察,与对照组相比,哮喘组小鼠气道壁及气道平滑肌明显增厚,黏膜下水肿,黏膜下层增宽,管腔狭窄,有时可见黏液栓堵塞,气道上皮细胞脱落,杯状细胞增多,黏膜下及管周有大量炎性细胞浸润,有时可见淋巴滤泡。CpG ODN及地塞米松组较哮喘组上述改变明显减轻。图像分析地塞米松组和CpG ODN组WAmuc/Pbm、WAmus/Pbm及WAi/Pbm较哮喘组明显降低而高于对照组(P<),地塞米松组和CpG ODN组两者间无显著差异(P>)。结果见表1、图1。 表1 气道形态学指标测定(略)图1 各组小鼠气道病理学改变 HE染色10× 免疫组化染色 对照组小鼠MMP9在气道黏膜上皮少量表达;小鼠MMP9在气道黏膜上皮表达量哮喘组较对照组明显增强(P<),地塞米松组和CpG ODN组较哮喘组明显减少(P

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