人胰腺癌细胞CFPAC1裸小鼠原位移植瘤模型的建立临床医学.docVIP

人胰腺癌细胞CFPAC1裸小鼠原位移植瘤模型的建立临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：人胰腺癌细胞CFPAC1裸小鼠原位移植瘤模型的建立临床医学 2 1 材料与方法 2 1．1 材料 2 1．2 方法 2 1．3 统计学处理 4 2 结果 4 2．1 移植瘤生长状况 4 2．2 血清学检测 5 2．3 病 理学 检查 5 3 讨 论 5 文2：裸鼠前列腺癌PC3M细胞移植瘤模型的建立及其Her2neu蛋白免疫组化检测临床医学 6 1 材料和方法 8 2 结 果 9 3 讨 论 10 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 15 正文 人胰腺癌细胞CFPAC1裸小鼠原位移植瘤模型的建立临床医学 文1：人胰腺癌细胞CFPAC1裸小鼠原位移植瘤模型的建立临床医学 胰腺癌是一种恶性程度极高的肿瘤之一，在西方国家其死亡率列癌症死亡第4位。在我国胰腺癌的发病率也呈上升趋势，20年约增长6倍[1]，每年发病人数已达万人，5年生存率＜5％。手术切除是胰腺癌能够达到根治的唯一选择，但大部分患者由于在确诊时已发生广泛转移而失去手术的时机，同时胰腺癌对放疗、化疗不敏感，因此建立适宜的人胰腺癌动物模型，可以为深入研究胰腺癌的发生 发展 、侵袭转移机制以及寻找新的 治疗 策略提供有效的手段。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 细胞与细胞培养 人胰腺癌细胞株CFPAC1购自 中国 科学 院上海细胞生物研究所，用含10％热灭活的小牛血清（Gibco公司）、100 U·ml-1青霉素和100 μg·ml-1链霉素的高糖DMEM（Gibco公司）培养基作为CFPAC1细胞培养液，于5％CO2、饱和湿度、37℃的细胞培养箱内常规培养。 1．1．2 实验动物 BALB/C nuu裸小鼠，雌雄各半，4～6周龄，体质量18～20 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证号SCXK(沪)20070005，在我校实验动物中心SPF级动物房中分笼饲养，饲料、饮水、笼具和操作器材及其它用品均灭菌处理后使用，实验时按无菌原则操作。 1．2 方法 1．2．1 皮下移植瘤模型 人胰腺癌细胞株CFPAC1体外常规传代培养，%胰酶消化处于对数生长期细胞，冰冷的无菌磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤3次，最后用PBS重悬成浓度为107ml-1的单细胞悬液。75％酒精棉球消毒裸小鼠皮肤，将(2～3)×106（ ml）的单细胞悬液接种于裸鼠右肩背部皮下,建立皮下移植瘤模型。密切观察皮下肿瘤生长情况，每周用游标卡尺测量肿瘤大小，按公式V＝1/2长径×短径2， 计算 肿瘤体积，并绘制皮下移植瘤生长曲线。 1．2．2 原位移植瘤模型 3周左右待皮下移植瘤长至1 cm大小时，颈椎脱位法处死皮下荷瘤鼠，消毒皮肤，取下肿瘤，浸入含100 U·ml-1青霉素和100 μg·ml-1链霉素的高糖DMEM无血清培养基，去除中央坏死组织，选取周围健康肿瘤组织，剪成大小约1 mm3瘤块供原位移植用。1％戊巴比妥钠溶液（50 mg·kg-1）腹腔注射麻醉裸鼠，75％酒精消毒皮肤，左上腹直肠旁线处行1 cm的纵行切口，仔细分开胃与脾之间的薄膜，暴露胰腺，剪开胰腺被膜，将1 mm3瘤块植入胰体尾处（图1），以80可吸收外科缝线缝合胰腺被膜。将胰腺轻轻送回腹腔，60可吸收外科缝线单层缝合腹壁肌层及皮肤。以上所有操作均在超净台内进行，术者佩戴外科手术放大镜。裸鼠均于术后第8周处死，收集标本待检。 左↑示胰腺，右↑示脾脏图1 外科手术原位移植 Fig 1Surgical orthotopic left arrow shows pancreas,the right on shows spleen. 1．2．3 检测指标 以上两组处死的裸鼠均经详细的解剖学检查，测量肿瘤体积，观察周围脏器侵袭及远处转移情况。收集肿瘤原发灶，以及所有可能发生侵袭、转移的脏器，如肝、肾、脾、肺、腹膜、淋巴结等标本，用10％中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，以4 μm厚度连续切片，行HE染色，常规光镜检查确定转移灶。部分标本行CEA免疫组化染色。处死时心脏采血，收集血液，送至我院检验科检测肿瘤相关抗原CA199和CEA。 1．3 统计学处理 计量资料和计数资料分别采用t检验和χ2检验进行统计学分析,P表示差异有统计学意义。 2 结果 2．1 移植瘤生长状况 皮下接种经3～4 d潜伏期，接种部位皮下可见灰白色结节，后呈圆形或椭圆形生长，每周测量肿瘤长径和短径，计算肿瘤体积，并绘制生长曲线(图2)。人胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的成瘤率为100％