丹酚酸B对内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究.docVIP

丹酚酸B对内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：丹酚酸B对内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 1 1 材料和方法 2 1．2 药物对H2O2所致HUVECs氧化损伤的影响 3 1．3 HUVECs CD54表达的测定方法 4 1．5 统计学处理 5 2 结 果 5 2．1 HUVECs细胞形态学观察 5 3 讨 论 7 文2：丹酚酸B对兔缺血再灌注心脏内皮细胞功能和血小板活化的影响 9 1 材料与方法 11 2 结果 12 3 讨论 14 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 16 正文 丹酚酸B对内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 文1：丹酚酸B对内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根及根茎。丹参归心、肝经,药性微寒,味苦、无毒,具有祛瘀止痛、活血调经、养心除烦的功效。近年研究显示，丹参有广泛的生物活性，其 治疗 心血管系统疾病的作用尤其受到关注，并已有相关药物在临床使用[14]。目前已有研究表明,其水溶性有效成分为治疗心血管疾病的主要药效物质基础，而丹酚酸B是其中较为重要的成分之一。目前关于丹酚酸B的研究主要集中于心肌缺血/再灌注损伤和缺氧/复氧损伤，而关于丹酚酸B对内皮细胞氧化性损伤的研究尚未见报道。鉴于血管内皮细胞所处的特殊位置（血液与间质组织间的一层半透性的屏障）及其损伤对心肌缺血/再灌注损伤的重要影响，我们研究了丹酚酸B对血管内皮细胞氧化性损伤的影响，以期为更全面了解丹酚酸B的药理作用提供相关依据。 1 材料和方法 药品、试剂和仪器 丹参注射液，生药 g·ml-1，正大青春宝药业有限公司，批号。肝素钠注射液，常州生物千红制药有限公司，批号030212。RPMI 1640培养基，Gibco产品。新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司，批号041030。胰蛋白酶（1∶250），Amresco分装。3%双氧水，南京兴蓝箭科技公司，批号1。乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号。一氧化氮（NO）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号。丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号。Rabbit Anti CD54(ICAM1)， ml(200 μg·ml-1)，武汉博士德生物工程有限公司。即用型SABC免疫组化染色试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司。DAB显色试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司。Percoll，100 ml( g·ml-1),北京夏斯生物有限公司，批号301944。Beckman冷冻台式离心机，美国Beckman公司。莱卡显微工作站，德国莱卡公司。精密移液器，吉尔森公司。Forma细胞培养箱，美国Forma公司。全自动高压灭菌锅，日本SANYO公司。超净工作台，苏州净化设备厂。24孔培养板，Costa公司。 1．2 药物对H2O2所致HUVECs氧化损伤的影响 1．2．1 HUVECs的培养及氧化损伤模型的建立[5] HUVECs按常规方法复苏后接种于40 ml培养瓶中，培养液为含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液，37℃、95% O2、5% CO2条件下培养，待细胞长满瓶底后，加入%胰蛋白酶37 ℃消化2～3 min，用新生牛血清终止消化。将细胞悬液移入离心管，1 000 r·min-1离心10 min，弃去上清液，用新鲜的RPMI 1640培养液重新悬浮细胞，将细胞浓度调整为1×108 L-1的细胞悬液，同样条件下继续培养，待细胞长满单层融合后，弃去上清，以含%血清的培养液培养24 h，使其同步化生长，即可用于试验。接种于24孔板的HUVECs同步化生长后，加入含有终浓度为200 μmol·L-1 H2O2的无血清的RPMI 1640培养液，作用24 h。 1．2．2 实验分组 （1)正常对照组：无血清的RPMI 1640培养液；（2）模型组：无血清的RPMI 1640培养液加200 μmol·L-1 H2O2作用24 h；（3）丹参注射液组：加入含有丹参注射液终质量浓度为 g·L-1的培养液预孵1 h，然后换成含有200 μmol·L-1 H2O2的培养液作用24 h；（4）丹酚酸B低剂量组：加入含有丹酚酸B终质量浓度为1×10-6 g·L-1的培养液预孵1 h，然后换成含有200 μmol·L-1 H2O2的培养液作用24 h；（5）丹酚酸B中剂量组：加入含有丹酚酸B终质量浓度为1×10-5 g·L-1的培养液预孵1 h，然后换成含有200 μmol·L-1H2O2