血清MicroRNAs在上颌窦癌非侵入性诊断中的价值评估.docVIP

PAGE PAGE 29 血清MicroRNAs在上颌窦癌非侵入性诊断中的价值评估 中文摘要 背景及目的上颌窦癌是常见的耳鼻喉恶性肿瘤，近些年来，上颌窦癌的发病率在多个国家呈上升趋势。研究指出上颌窦癌的发生发展是由多因素参与的渐进性过程，但上颌窦癌的具体发病机制尚不十分清楚。由于多数上颌窦癌早期诊断难以发现，为此，有必要对上颌窦癌进行早期筛查。然而，传统的筛查手段和已经发现的肿瘤标记物无法同时满足高敏感性、高特异性及同时易于检测的要求。微小RNA即miRNA是在转录后水平调控基因表达的小片段单链RNA分子，随着人们对其功能及基因表达调控的逐步认识，发现微小RNA的表达具有组织特异性，且有类似于癌基因或者抑癌基因的功能。进一步的研究发现，miRNA在外周血中稳定存在且足以被检测出来，在上颌窦癌中已发现多种循环miRNA的表达水平出现异常，因此，血清/血浆miRNA可能成为一种新型的上颌窦癌非侵入性的生物学标志物。参考国内外相关文献，初步确定miR-375、miR-133a、miR-21、miR-29a、miR-92a、miR-221、miR-874及miR-760等8种miRNAs为本文的研究的对象，使用荧光定量PCR即qRT-PCR检测这些待测miRNAs在上颌窦癌患者及相应正常人血清中的差异表达情况，进一步探讨这些miRNAs在上颌窦癌非侵入性诊断中的价值。 方法收集自2012年10月至2015年8月间在随州中心医院行鼻内镜或前后鼻镜检查，经组织病理检查明确诊断的上颌窦癌患者30例。上颌窦癌患者的TNM分期标准根据国际抗癌联盟（International Union against Cancer，简称UlCC）/美国癌症联合委员会（Amedcan Joint Committeeon cancer，简称AJCC）TNM病理分期第六版为标准。血清标本采集前未对患者进行任何治疗，采集前均通过武汉大学人民医院医学伦理委员会批准及患者知情同意。并收集病人的年龄、TNM分期、肿瘤位置、浸润深度、分化程度等相关临床病理资料。另选30例相匹配的健康人作为正常对照组。收集研究对象的血液样本，抽提血清中的总RNA并纯化血清RNA样本。使用RQ1 RNase- Free DNase DNA酶处理试剂盒对已提取的RNA进行除DNA处理，并用M-MLV逆转录试剂盒对上述经DNase酶处理的RNA进行反转录步骤合成待检测miRNA的互补DNA即cDNA。用实时荧光定量qRT-PCR技术检测上述8种待测miRNAs在上颌窦癌组及健康对照组血清中的表达情况。miRNA的表达量的计算方法采用2-△△Ct相对定量法，比较两组样品间的差异表达情况。获得的数据采用SPSS17.0统计软件进行处理，上颌窦癌组及健康对照组的待测miRNA的表达水平的比较采用非配对t检验作统计学分析，待测miRNA的相对表达水平与临床病理资料的关系采用非配对t检验或单因素方差分析进行检验。P0.05为差异有统计学意义。 结果各血清样本总RNA提取效果较好，提取的血清中总RNAOD260/OD280比值均在1.9-2.1之间，电泳结果也进一步证实提取的总RNA是高纯度无污染的。采用荧光定量RT-PCR的方法检测候选miRNA的表达情况，并采用5srRNA进行归一化处理。miRNA定量PCR扩增曲线及熔解曲线，结果显示熔解曲线均为单一峰，说明qRT-PCR扩增特异性较好。通过上颌窦癌患者组与正常对照组之间待测miRNA的相对表达量的比较，结果未发现待测miRNA的表达在两组之间出现差异表达情况。待测miRNA的表达与患者的性别、年龄、肿瘤细胞分化程度、上颌窦癌的TNM分期、淋巴结浸润以及CEA的表达等临床病理因素之间均无相关性。 结论传统肿瘤标志物CEA的表达水平在上颌窦癌组与正常对照组之间差异具有显著性（P﹤0.001），其诊断上颌窦癌的阳性率为43%，CEA作为常规诊断上颌窦癌的辅助诊断指标仍有重要价值；通过上颌窦癌患者组与正常对照组之间待测miRNA的相对表达量的比较，结果未发现待测miRNA的表达在两组之间出现差异表达情况；待测miRNA的表达与上颌窦癌患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结浸润及CEA表达等临床病理因素间均无相关性。本研究尚未发现待测的miRNA在上颌窦癌患者血清中与正常人血清中表达水平相比较有差异表达，血清miRNA作为非侵入性诊断上颌窦癌的生物标志物有待进一步的研究及验证。 关键词上颌窦癌；血清；miRNA Abstract Background and Objective Maxillary sinus carcinomas is one of the most common gastrointestinal cancer worldwi