唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响.docVIP

唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 4 文2：呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响 5 1 材料与方法 6 2 结 果 8 3 讨 论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响 文1：唑吡坦对大鼠下丘脑内睡眠相关基因表达的影响 【Abstract】 Objective To study the effect of hypnotic zolpidem on the mRNA expression of some sleeprelated genes in the Rats were infused with zolpidem or saline (vehicle) into the stomach and then were divided randomly into zolpidem and vehicle mRNA levels of GABAA receptor α1 and α2，melatonin 1a receptor，hypocretin and hypocretin receptor 2 in the hypothalamus were examined by RT Compared to the vehicle group，the expression of hypocretin and melatonin 1a receptor were downregulated and hypocretin receptor 2 expression was upregulated in zolpidemtreated group (P for all).However，the expression level of GABAA receptor α1 and α2 had no obvious change induced by zolpidem(P).Conclusio The hypnotic effect of zolpidem in the hypothalamus may be performed by the pathway of melatonin and hypocretin，not by GABA in the process. 【Key words】 GABA;Hypocretin;Hypnotic;Hypothalamus;Melatonin 唑吡坦是非苯二氮卓类催眠药物，现今广泛被用于 治疗 暂时性及慢性失眠〔1〕。以往有研究表明唑吡坦在黑质和外侧隔核主要通过调节GABA并作用于GABAA受体α亚基的途径而发挥其催眠作用〔2〕。下丘脑也是体内重要的参与睡眠调节的脑区〔3〕。但是唑吡坦在下丘脑内是否也存在相似的机制却少有报道。褪黑素受体、hypocretin及其受体含量在下丘脑内极其丰富〔4〕。特别是近年来，关于唑吡坦与褪黑素联合应用共同参与睡眠的治疗〔5〕的报道也被一些学者提出。因此，本实验应用RTPCR的方法观察了口服给予唑吡坦对下丘脑内的GABAA受体α亚基表达的影响，同时也检测了该区褪黑素受体1a、hypocretin及hypocretin受体2表达的情况，为进一步揭示唑吡坦在脑内的催眠机制提供新的依据。 1 材料与方法 动物及分组 雄性Wistar大鼠15只由香港中文大学实验动物服务中心提供。食水自取，饲养于12 h光照/12 h黑暗条件下(光照开始)，室温为22℃±2℃。15只大鼠(重约450～550 g)随机分为唑吡坦组(n=8)和对照组(n=7)。晨起6:00灌胃给予唑吡坦(5 mg/kg)或生理盐水。 实验试剂 Trizol试剂和所有引物(Invitrogen);10×PCR缓冲液、TaqDNA聚合酶和dNTP(Ameham);MMLD逆转录酶和100 bp DNA标记(Promega); 琼脂糖(USB) 标本采集 给予唑吡坦后，当其在体内作用到达最大药效时，将大鼠置于密闭容器内通以CO2麻醉处死，迅速分离出下丘脑，投入液氮。后转入-80℃冰箱保存待RNA提取。 RTPCR 采用Trizol法提取总RNA。经分光光度计测定RNA纯度良好后，RNA在MMLD逆转录酶作用下合成cDNA。再以cDNA作为模板参与完成PCR反应。PCR扩增的条件为：94℃预变性10 min;94℃变性30 s;退火30 s;72℃延伸3