绿色荧光蛋白GFP的研究进展及应用（临床医学资料）.docVIP

绿色荧光蛋白GFP的研究进展及应用（临床医学资料） 文档信息 属性： F-01NHB4，doc格式，正文24526字。质优实惠，欢迎下载！ 适用： 作为医学资料、临床医学资料写作的参考文献，解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容摘取等相关工作。 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：绿色荧光蛋白GFP的研究进展及应用 1 1 引 言 2 2 GFP的理化性质，荧光特性及其改进 2 3 GFP的应用 7 4 问题与展望 9 文2：仿生超疏水材料的研究进展及应用 10 1 润湿性原理 10 2 制备方法 11 3 应用与展望 13 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 绿色荧光蛋白GFP的研究进展及应用（临床医学资料） 文1：绿色荧光蛋白GFP的研究进展及应用 Abstract：The green fluorescent protein (GFP) from the jellyfish Aequorea vietoria is a great potential for application of the marker, has a wide range of applicatio. The article on the physical and chemical properties, the fluorescence characteristics, improvement and application of GFP are reviewed. Key words：Green fluorescent protein; Marker;Fluorescence characteristics;Progress; Improvement; Application 1 引 言 发光是海洋无脊椎动物中普遍存在的现象，一些腔肠动物包括水母、水螅和珊瑚等受到机械性干扰时都可发射绿色荧光，而栉水母类发射蓝色荧光。绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于这些腔肠动物体内的生物发光蛋白。1962年Shimomura等［1］首先从多管水母(Aequoria victoria)中分离出一种分子量为20kD的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。随后，人们从不同动物体内提取出了各种不同的GFP，其中研究较为深入的是来自多管水母科(Aequorleidae)和海紫罗兰科(Renillidae)的GFP，即Aequoria GFP和Renilla GFP。 2 GFP的理化性质，荧光特性及其改进 GFP的理化性质 从水母体内分离到的GFP基因，长达，由3个外显子组成，分别编码69、98和71个氨基酸。GFP本身是一种酸性，球状，可溶性天然荧光蛋白。Aequoria GFP分子量约27×103，一级结构为一个由238个氨基酸残基组成的单链多肽；而Renilla GFP是分子量为54kD的同型二聚体。两种GFP有不同的激发光谱，Aequoria GFP在395 nm具有最高光吸收峰，肩峰为473 nm；Renilla GFP在498 nm具有强烈的光吸收，肩峰为470 nm。两种GFP含有相同的生色团，发射光谱基本相同（λmax=508～509 nm） GFP性质极其稳定，易耐受高温处理，甲醛固定和石蜡包埋不影响其荧光性质。其变性需在90℃或pH＜或pH＞的条件下用6 mol/L盐酸胍处理，一旦恢复中性环境，或去除变性剂，虽然变性的蛋白质并不能完全复性，但是复性蛋白质同天然蛋白质对温度、pH变化的耐受性、抗胰蛋白酶消解的能力是相同的。更重要的是，它们在很大的pH范围内（pH7～）的吸收、发射光谱也是相同的。Renilla GFP的稳定性就更为显著。它在上述一系列的变性条件下都很稳定，不易变性。根据Sheen等［2］的研究，GFP在受体内表达时，其稳定性并不亚于CAT蛋白，因而可以得到持续时间较长的荧光。 GFP的荧光原理 GFP的性质和发射光谱的稳定性是同其生色团结构的稳定性密不可分的。GFP表达后折叠，在氧存在的条件下，使66位氨基酸残基的α、β键间脱氢。由65～67位的氨基酸残基（Ser-Tyr-Gly）环化为稳定的对羟基苯咪唑啉酮（4-p-hydroxybene-5-imidazolinone），形成生色团（基于组成生色团的元件不同，可将已知的GFP及其变种分为7种，每一种都有一组不同的荧光激发和发射波长）［3-5］。GFP无需再加任何底物和辅助因子，在紫外或蓝光激发