课件7-3培养基灭菌及设备灭菌.ppt

培养基灭菌及灭菌设备 1、灭菌的方法 2、培养基的灭菌 3、培养基的分批灭菌 4、培养基的连续灭菌 1，在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的后果： 生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力； 在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主； 杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难 杂菌会降解目的产物； 杂菌会污染最终产品，杂菌会污染最终产品； 发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象。 2，工业上具体措施包括： 1）使用的培养基和设备须经灭菌； 2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； 3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； 4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； 5）使用无污染的纯粹种子。 3，培养基灭菌的目的 杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。 4，培养基灭菌的要求 达到要求的无菌程度（10-3） 尽量减少营养成分的破坏，在灭菌过程中，培养基组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： 培养基中不同营养成分间的相互作用； 对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。 二、培养基的灭菌一、灭菌的方法 灭菌：用理化方法杀死或除去物料或设备中一切有生命物质的过程。常用的有： 1、化学药剂灭菌 常用的灭菌剂 化学物质名称 有效浓度 化学物质名称 有效浓度 新洁尔灭(苯扎溴铵) 0.25% 甲醛 37% 杜灭芬 0.25% 戊二醛 2% 高锰酸钾 0.1%-0.25% 苯酚 0.1%-0.15% 漂白粉 5% 过氧乙酸 0.02%-0.2% 酒精 75% 焦碳酸二乙酯 0.01%-0.1% 煤酚皂（来苏尔） 1%—5% ? ? * 2、射线灭菌 原理：利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。 常用：紫外线、X射线和γ射线。 使用范围：用于室内空气及器皿表面灭菌 3．干热灭菌 原理：利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。 常用方法：灼烧和电热箱加热，140-180℃ 1-2小时 使用范围：玻璃及金属用具及沙土管灭菌 4．湿热灭菌  原理：蒸汽冷凝放出大量潜热，具有穿透力，且在高温有水分条件下，蛋白质易变性。 常用方法： 水煮常压灭菌：100℃ 饱和蒸汽灭菌：一般121℃，15-20分钟 使用范围：培养基和发酵设备灭菌。 5．过滤除菌 原理：利用微生物不能透过滤膜除菌。 方法: 0.01~0.45 ?m孔径滤膜， 使用范围：用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。 （一）灭菌的原理 1、热阻：微生物对热的抵抗能力用热阻表示。 微生物 相对热阻 营养细胞和酵母 细菌芽孢 霉菌孢子 病毒和噬菌体 1.0 3×106 2~10 1~5 2、对数残留定律 N：任一时刻的活细菌浓度（个/L） t：时间（min） K：比热死速率常数（min-1） 死亡速率 理论灭菌时间的计算（积分） N0 τ=2.303/k log — N 实际灭菌的经验数据 高温灭菌(High temperature setrilization)120℃，维持(Maintaining)20-30分钟 K—比死亡速率（s-1） NO -开始时菌个数 N - 残存菌个数 工程上，N为10-3/罐 灭菌温度与菌死亡反应速度常数的关系阿累尼乌斯公式： K=A·exp-△E/RT K—菌死亡的速度常数 A—阿累尼乌斯常数 exp—2.71 △E—杀死细菌孢子的活化能（ J/K ·mol ）  R—气体常数[8.314J/（ mol·K)] T—绝对温度（K） 灭菌温度（?C） 达到灭菌程度的时间（min） 维生素B1的损失（%） 100 110 120 130 140 150 843 75 7.6 0.851 0.107 0.015 99.99 89 27 10 3 1 三、培养基的分批灭菌 定义： 将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽加热，使培养基和设备同时灭菌的一种灭菌方式。 1，分批灭菌的设计 在发酵罐中进行实罐灭菌，是典型的分批灭菌。全过程包括升温、保温、冷却三个过程 * * 对数残留公式：K代表微生物耐热性的特征，其单位为min-1，随菌种与温度而异，相同温度下，K越小则微生物越耐热,121度时，细菌芽孢为1 min-1,而营养细胞为10-1010 min-1；灭菌温度越低则K值越小。 K因温度和物种而异，K和温度是呈正向关系的