蛋白组学二维电泳.pptxVIP

1;第二章 二维电泳与蛋白质分离;一、蛋白质的提取与样品制备;二维电泳分析中的样品制备（目标蛋白在细胞中的存在方式）;二维电泳分析中的样品制备;破坏蛋白质与其它大分子之间的相互作用，形成线性、独立的肽链 样品裂解液新鲜制备，并且分装冻存于-80°C，不要反复冻融样品。 完全去除样品中的核酸和某些干扰蛋白。通过超速离心清除所有的杂质。 主要去除盐、小分子化合物、脂类、离子去污剂、核酸、多糖、脂类、酚类等 尽量去除起干扰作用的高丰度或无关蛋白，从而保证待研究蛋白的可检测性。;蛋白质制备流程;样品类型;细胞裂解的方法;2、剧烈的细胞裂解方法:破碎不容易破碎的细胞如固体组织中的细胞或有坚韧细胞壁的细胞;蛋白质的分离与提取方法;裂解液的组成;离液剂（Chaotropic Agents）;去污剂（Detergents）;还原剂（Reducing Agents）;两性电解质（Carrier ampholytes）;两性电解质对蛋白溶解性和2-DE分辨率的影响;蛋白酶抑制剂防止蛋白酶裂解; （4）肽蛋白酶抑制剂：价格贵，本身会出现二维电泳图中。 亮抑酶肽：在DDT中可逆抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶。 胃蛋白酶抑制剂A：作用对象为天冬氨酸蛋白酶。 抑蛋白酶A肽：作用对象为丝氨酸蛋白酶。 苯丁抑制素：作用对象为氨基蛋白酶。  （5）TLCK、TPCK：甲