体外受精与核移植动物 .pptxVIP

体外受精与核移植动物;13、1 胚胎工程;13、2 体外受精动物;体外受精技术的发展; 这些理论和方法上的成就,推动了体外受精技术的发展,试管小鼠(Whit-tingham,1968)、大鼠(Toyoda和Chang,1974)、婴儿(Steptoe和Edwards,1978)、牛(Brackett等,1982)、山羊(Hamda,1985)、绵羊(Hanada,1985)和猪(Chang等,1986)等相继出生。 ;体外受精动物的概念:;体外受精动物的意义:;体外受精动物培育的程序;精子采集与体外获能;卵细胞回收与成熟培养;(1)超数排卵;(2)从活体卵巢中采集卵母细胞;(3)从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞; ;母细胞的选择; ;卵母细胞的成熟培养;卵母细胞成熟的一些标志;;体外受精;二 显微受精技术(辅助受精技术);辅助受精两种方法;透明带修饰法;精子注入法;胚胎培养;胚胎移植;胚胎移植的方法;2、非手术法;13、3 试管婴儿;二、试管婴儿 ; ;试管婴儿可分为三个类型:;第二代试管婴儿:;第三代试管婴儿:;第四代试管婴儿:;试管婴儿(第一代)技术步骤;13、4 核移植动物;13、4、1 核移植动物培育流程:; ⑴胚细胞 用0、2%链霉蛋白酶预处理胚胎,溶去胚胎的胶膜及透明带,分离出单个卵裂球。消化透明带的时间是影响卵裂球质量的重要因素,作用时间短,透明带不能充分消化,卵裂球不易获得;作用时间长,则影响到卵质膜,容易破裂,在操作时容易失败。因此,在分离卵裂球时应在解剖镜下监视透明带的消化过程,当透明带变薄,膨胀适度时就应移出,再用适当口径的吸管吹打使之分离。另外,苏格兰学者Campbell等显微分离胚盘细胞并在体外进行缺血饥饿传代培养,诱使细胞处于“静止”状态,以便调整染色体结构,从而有助于核的重组与发育,他们使用这种方法建立了绵羊TNT4细胞系,该细胞形态类似于胚胎干细胞,但更扁平、上皮化。; ⑵体细胞 　最早用青蛙肠粘膜上皮细胞获得了后代。Wilmut等用绵羊乳腺细胞获得Dolly羊。美国夏威夷大学Ryuzo Yanagimachi教授领导的一个国际科研小组于1998年以小鼠卵丘细胞为核供体,采纳吸移管注入,利用机械和化学激活方式进行细胞的融合,成功培育三代克隆小鼠。对小鼠、牛体细胞移植的相关研究中发现休眠(G0)的颗粒细胞核与去核MⅡ期卵母细胞构成的体细胞重构胚,其发育率及产生克隆后代的能力远高于其它类型的休眠体细胞,这估计缘于颗粒细胞上存在着与卵母细胞紧密联系的胞质微绒毛桥的缘故,它或许有助于供体核同受体核胞质因子的交换。;细胞核移植所用受体细胞一般采纳MⅡ期成熟卵细胞,能够从动物体内直截了当获得,但数量有限。目前,高质量的体外成熟(IVM)培养的卵细胞能够替代体内成熟卵细胞进行核移植。 ;受体细胞去核方法:; ⑵功能性去核法:; ⑶化学诱导去核:;3、 细胞核移植;⑵透明带下注射法; 4、 重组胚激活; ⑵化学激活; 5、 重组胚培养和移植; ⑵体内培养:;13、4、2 胚胎细胞克隆动物;13、4、3 体细胞克隆动物真正意义上的克隆;;体细胞克隆的应用与意义 ; 2001年8月7日,美国科学院关于克隆人问题的讨论会上,三位表示要克隆人的科学家。 左:意大利国际联合研究所所长Severino Antinori 中:克隆援助(Clonaid)公司老板Brigitte Boisselier 右:美国肯塔基大学教授Panayiotis Michael Zavos 他们克隆人的目的都是为了给不孕的夫妇培育后代。;考虑: 现现在克隆差不多取得了特别大的成就,那它的接着发展将会给我们这个现存的社会会带来什么影响？ 您是否可想过假如有一天您和您的复制人一起生活呢？ …… 考虑才回创造哟！;13、5 冷冻保存技术;15、5、1 胚胎冷冻保存;胚胎冷冻保存抗冻保护剂的选择;⑵非渗透型冷冻保护剂;胚胎冷冻保存冷冻方法:; 大致步骤如下:;⑷将装入胚胎的细管放入冷冻仪中,在0℃平衡10min,以1℃／min的速度降至—7~—6℃,并在此温度下诱发结晶,平衡10min,然后以0、3℃的速度降温至—38~—35℃,投入液氮保存。 ⑸解冻时从冷冻液中取出装胚胎的细管,在空气中平衡10s,马上置于37 ℃水浴解冻,1min后取出完成解冻过程。 ⑹将细管中的冷冻液及配套推出,在显微镜下找到配套并移入解冻液。采纳三步法解除甘油,每步5~7min,最后用PSB液将胚胎洗3~5遍,供移植备用。;(二)玻璃化冷冻与复苏;大致步骤:; ⑷将细管在液氮罐颈部预冷5min后投入液氮中保存。 ⑸解