体外转录试剂盒说明书.docxVIP

使用试剂盒时所有的试剂要放置在冰 上 转录反应步骤和孵育 .解冻冷冻的试剂 把RNA聚合酶混合物放置在冰上，它在甘油中保存，没有被保存在?20。 vortexIO xreaction buffer和2 xNTP/CAP至完全溶解，一旦解冻，反应过程中把 xNTP/CAP 放在冰上、10 xreaction buffer 保存在室温， 所有的试剂在打开之前都应该短暂的微微离心，以防丢失或污染到离心管边缘的物质。 .室温下转录反应 如果反应在冰上进行,10 xreaction buffer中的亚精胺可以与模板中的DNA共沉淀， 离心管中加入水和核甘酸后再加入10 xreaction buffer ° 以下是一个20ul的反应体系，可按需要放大或缩小。 当RNA长度为300base-5kb时采用以下反应体系 对于更长或更短的转录参考20页的“ Optimizing yield of long transcripts…和 “ Optimizing yield of short transcripts ” 部分 ° 当合成转录的长度大于5或6KB时，限制GTP生成率，会导致产量降低、过早终止转录。 为了避免这种情况，可能需要补充额外的GTP支持反应。下面是添加特定体积的GTP对普 通转录反应的影响。 对于T7和T3试剂盒，提供的GTP为30mM。对于SP6，为20mM.）应该添加多少额 外的