仪器分析第20章高效液相色谱.pptxVIP

气相色谱回顾气相色谱仪的基本构造掌握气相色谱仪检测器的原理 TCD, FID, NPD, ECD, FPD 性能指标：灵敏度、检出限、最小检出浓度、 响应时间、线性范围气相色谱固定相的分类及选择 气-固色谱吸附剂：硅胶、氧化铝 、活性碳 、高分子微球 气-液色谱固定液：相对极性(角鲨烷P=0， ?,?’-氧二丙腈P=100)特征常数(5种代表性化合物在被测固定液与参比角鲨烷上保留指数的差值，罗氏常数和麦式常数)化学结构气相色谱分离条件的优化固定相、检测器、流动相流速、色谱柱温度毛细管气相色谱的特点渗透性好、相比大、总柱效高、柱容量小第20章 高效液相色谱法本章学习要点高效液相色谱法的特点高效液相色谱仪基本构造液相色谱固定相及分离原理液相色谱流动相的选择作业：20-1; 20-2;20-4; 20-7; 20-1020-1 概述一、高效液相色谱的特点二、高效液相色谱的分类高效液相色谱与气相色谱的比较相同点原理仪器组成不同点分析对象流动相色谱柱温度分析对象气相色谱：气体和沸点较低的化合物， 占有机物总数20%高效液相色谱：高沸点、热稳定性差、分子量大的物质， 占有机物总数80%流动相气相色谱流动相：对组分没有亲和力的惰性气体，对分离选择性几乎无影响高效液相色谱流动相：可选用不同极性的液体选择余地大对分离影响大（与组分或固定相均作用）色谱柱温气相色谱柱温： 一般较高高效液相色谱柱温：通常为室温高效液相色谱的特点高压：150 - 350 ?105 Pa 高速： 一般 1 h高效： 柱效高 高灵敏度： 10-9 g/ml (紫外检测器） 10-12 g/ml（荧光检测器）高效液相色谱的局限性成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂。缺少灵敏度高的通用型检测器复杂样品分离，缺少总理论塔板数达数十万的色谱柱。受压易分解或变性的生物样品局限1成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂。Solution: 微型化（毛细管色谱柱）、水为流动相等Nanobore column (0.025 mm ? i.d.? 0.1 mm)Chip column coupled to MSZORBAX 300SBC18 5 μm particlesH.-F. Yin et al., presented at the 18th International Symposium onMicroscale Separations and Analysis, HPCE, San Diego, January 2003.Separation of peptides on chip column局限2缺少灵敏度高的通用型检测器Solution: 蒸发光散射检测器 质谱检测器 局限3复杂样品分离，缺少总理论塔板数达数十万的色谱柱。Solution: UPLC (UHPLC) 耐受压力：350 ?105 Pa The sample was run using constant-flow pumps at 52000 psi on a 38cm long capillary packed with 1.0 μm C18 particles.二、高效液相色谱的分类按分离原理分类：分配色谱吸附色谱离子交换色谱尺寸排阻色谱疏水作用色谱二、高效液相色谱的分类按分离规模分类：制备色谱 柱内径10mm半制备色谱 柱内径5-10mm分析型色谱 柱内径 5 mm20-2 高效液相色谱仪20-2 高效液相色谱仪高效液相色谱仪的结构高效液相色谱仪的主要部件一、高效液相色谱仪的结构二、高效液相色谱仪的主要部件高压输液系统进样系统分离系统检测系统附属系统(一）高压输液系统储液罐高压输液泵过滤器压力脉动阻尼器1.储液罐必须有足够的容积与溶剂不发生化学反应便于对溶剂进行脱气不锈钢、玻璃、氟材料容积：500 - 2000 cm3溶剂的过滤与脱气过滤：除去溶剂中的固体微粒脱气：除去溶剂中溶解的气体过滤滤膜过滤0.22 or 0.45 μm滤膜过滤器烧结不锈钢材料制成孔径：2 - 10?m脱气超声波清洗器在线真空脱气机2.高压输液泵对泵性能的要求输出压力高150 - 300 bar流量范围广0.1 -- 10 mL/min 可调流量稳定 无脉动，流量精度 0.5% 左右耐腐蚀 适用于各种有机溶剂、水、缓冲溶液往复泵泵内体积小易于更换溶剂和清洗输出液压高适于梯度淋洗流速恒定对柱塞和单向阀要求高输出液有脉动单泵与双泵梯度淋洗装置低压梯度高压梯度（二）进样系统取样和进样功能手动和自动要求：密封性好死体积小重复性好进样时对色谱系统的压力和流量波动小手动进样自动进样器(三)分离系统色谱柱柱温箱*色谱柱柱材料：不锈钢柱长度： 5 - 30 cm柱内径：2 - 5 mm填料：3 - 1