杭太俊药物分析体内药物分析讲课文档.pptVIP

对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采用离子对提取 ①原理 ②应用 阴离子：COOH+ SO3H- 反离子 四丁基铵 阳离子：NH2+ 反离子烷基或芳基磺酸盐 提取溶剂用量:一般在试管中进行 有机相与水相比1:1到5:1 分离与浓集 Company Logo 现在三十页，总共七十八页。 分离与浓集 固相萃取SPE 是目前使用相当广泛的一种萃取方法，惜乎价格较贵 将不同填料作为固定相装入小柱，药物溶液通过小柱时，药物被吸附、分配、离子交换，或其它亲和力作用，使药物及内源性物质同时被保留在固定相上，再选用适当溶剂洗脱药物的方法 这方面，美国是老大 Company Logo 现在三十一页，总共七十八页。 用有机溶剂(甲醇)冲洗——洗净 用水冲洗——活化 上样 用水或缓冲液冲洗，洗去内源性物质 有机溶剂洗脱药物 收集洗脱液······ 固相萃取步骤 Company Logo 现在三十二页，总共七十八页。 方法好价格贵 Company Logo 现在三十三页，总共七十八页。 ①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理 反相C18 固定相的6~10倍体积甲醇洗柱，使溶剂化 6~10倍水缓冲服液冲洗达分离状态 ③上样 ④分离 用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通N2干燥固相 ⑤洗脱待测物 改变pH或极性 固相萃取具体步骤 Company Logo 现在三十四页，总共七十八页。 （1）流速 流速快，按触不充分，样品流失 回收率低 柱处理 5~10ml·min-1 洗脱 0.2~1ml·min-1（〈300mg〉 2~5ml·min-1（300mg） （2）装样 过载 突破性试验 已知浓度样品液 ① 小体积上柱→洗脱回收百分率 ②加大体积→洗脱回收百分率 ③绘图 当回收率下降时为过载 固相萃取具体步骤 Company Logo 现在三十五页，总共七十八页。 超滤分离法 是以多孔半透膜（超滤膜）作为分离介质的一种膜分离技术，选用不同的孔径的不对称膜，即可按照分子量大小进行分离 适合TDM血样分析 Therapeutic drug monitoring Company Logo 现在三十六页，总共七十八页。 缀合物的水解 酶水解法 酸水解法 溶剂解法 book Company Logo 现在三十七页，总共七十八页。 化学衍生法 why? 某些药物或者代谢产物极性大，挥发性低，或者对检测器不够灵敏，难以满足常规HPLC及GC检测的需要，因此进行衍生 How for GC? 硅烷化 酰化 烷基化 不对称化 Company Logo 现在三十八页，总共七十八页。 化学衍生法 why? 某些药物或者代谢产物极性大，挥发性低，或者对检测器不够灵敏，难以满足常规HPLC及GC检测的需要，因此进行衍生 How for LC? UV FL 非对映衍生化 ? Company Logo 现在三十九页，总共七十八页。 化学衍生法 非对映衍生化 ? 对映体：一个化合物的两个光学异构体，其分子在整体上互为不能重叠的镜像。 分子量、分子式完全相同。应用普通色谱方法难以分离。通过衍生可以使之非对映化。根据构象等理化性质差异进行分离。 Company Logo 现在四十页，总共七十八页。 分析方法的建立 方法的选择 Chromatography？ immunoassay ？ biology？ Company Logo 现在四十一页，总共七十八页。 分析方法的建立 方法建立的程序 条件筛选？ 条件优化？ 实际样品测试？ Company Logo 现在四十二页，总共七十八页。 分析方法的建立 方法的验证 特异性 标准曲线与定量范围 定量下限 准确度与精密度 稳定性 回收率 分析过程的质量控制 未知样品浓度超出范围的处理 相关物质测定 其它方法验证 Company Logo 现在四十三页，总共七十八页。 第四节 体内样品分析方法与方法验证 (一)、特异性 所测的物质是原型药物或特定的活性代谢物，内源性物质和响应的其他代谢物及其他药物不影响样品的测定。 空白血浆 空白血浆＋标准物质 受试血浆 Company Logo 现在四十四页，总共七十八页。 第四节 体内样品分析方法与方法验证 (二)、标准曲线与线性范围 6.4 12.8 19.225.6 32 3 2.4 1.8 1.2 0.6 0 茶碱(μg/ml) · · · · · Y=9.566?10-2X+6.153?10-3 r=0.9