润达生化培训：01生化分析基础.pptxVIP

生化分析基础;目录;分光光度法的工作原理 “墨水颜色”的深浅可以间接反映墨水的浓度;分光光度法的工作原理;分光光度法的工作原理;;分光光度法的工作原理;朗伯比尔定律：当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时, 其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.;分光光度法的工作原理;分光光度法的工作原理 Q：为什么朗伯比尔定律计算吸光度只适用于单色光？;;目录;样本盘样本架;试剂瓶试剂室;2017-03-31;反应杯和反应盘;取样/试剂;混匀/搅拌系统;温控和定时;定时;光源和检测器;分光光度法的工作原理 了解一下分光光度法检测的完整流程（前分光）;分光光度法的工作原理 再了解一下另一种分光光度法的流程（后分光）;数据计算;清洗系统;分光光度法的工作原理 Q：后分光模式相比前分光模式有什么优点？;分光光度法的工作原理;;目录;（一）必选分析参数 ;7．样品量（sampling volum） 常量、减量和增量。 8．第一试剂量 （first reagent volum） 一般20-300μl 9．第二试剂量（second reagent volum）同上。 10．总反应容量（total reacting volum） 一般180-350μl，NT是100。 11．孵育时间（incubate time） 12．延迟时间（delay time）;13．读点时间 /测量点 14．校准液（calibrator）个数及浓度 15．校准K值（calibrate coefficient）或理 论K值 16．小数点位数（decimal point digit） ;（二）备选分析参数;1．样品预稀释 　 2．底物耗尽值 3．前区检查　 4、试剂空白吸光度 5、试剂空白速率 6、方法学补偿系数 7、线性范围 8、参考范围 …我是省略号…;目录;反应曲线VS定标曲线;;终点法 固定时间法 连续监测法（速率法）;（一）终点法（end assay） 被测物质在反应过程中完全被转变为产物，到达反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。该法称为平衡法更为恰当。从时间-吸光度曲线来看，到达反应终点或平衡点时，吸光度将不再变化。终点法参数设置简单，反应时间一般较长，精密度较好。 ;终点时间的确定;1．一点终点法（one point end assay）;一点终点法反应曲线 ;2．两点终点法（two point end assay）;图4-4　两点终点法反应曲线 ;我是小总结，我又来??;（二）固定时间法（fixed-time assay）;图4-6　固定时间法反应曲线 ;（三）连续监测法（continuous monitoring assay）;图4-7　连续监测法反应曲线 ;连续监测法的优点;连续监测速率法（检测一段时间内吸光度的平均变化率，主要为酶促反应）;两点速率法（检测两个不同时间点之间的吸光度之差，除以时间差得到的变化率，不受反应曲线线性不佳的影响，适用于特定项目）;此阶段由于样本中待测物浓度太高，反应体系吸光度出现急剧变化。;我还是小总结