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第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 22页 《微生物检验技术》学习指南 项目一：血液标本采集 一、项目分析 二、学习指导 采集血液标本进行细菌培养是微生物检验常用的技术之一，适用于临床菌血症、败血症、脓毒血症等的病原学检查，严格无菌操作是获得真实病原体的必要保证。微生物检验人员在接收到医生开出的检验申请单后，多数情况下是同时接受护理人员送来的血培养标本，直接进行验收、登记、培养即可。门诊病人、临床血液采集困难病人则由检验科人员采集，首先选择适宜的培养基，一般情况下选择普通和厌氧增菌培养基，然后进行抽血，最常用抽血部位是肘正中静脉，特殊情况下可用股静脉和颈静脉，新生儿可用后囟采血。抽血前在采血部位先用碘酒再用酒精由内向外擦拭消毒，待消毒部位干燥后用一次性注射器刺入血管抽取血液，抽血量与培养基量之比约1：10，成人一般采集5～10ml，婴幼儿一般采集1～5ml，迅速注入培养基内，轻轻混匀，将培养瓶上的条形码撕下贴于申请单上，送入细菌室再行编号、登记、培养。  项目二：脓液、痰液标本采集 项目分析 二、学习指导 脓液、痰液细菌培养的标本一般由临床医护人员采集送往微生物检验室。门诊病人的标本采集 则由微生物检验工作人员负责。首先接收到医生开出的申请单后依据申请内容采集标本。封闭性脓肿用注射器抽取脓液送检标本；开放性脓肿用棉签或无菌纱布采集脓液放置无菌器皿中送检标本。痰液标本一般需要采集晨痰，采集前嘱咐病人用清水漱口三次，然后用力咳出气管深部痰液，置于无菌容器内送检。接收或采集的痰液标本需做性合格评价，一般低倍镜下每个视野上皮细胞数＜25个，白细胞数＞10个为合格，可进行微生物的分离培养，反之则拒收或重新采集。对接收和拒收的标本均应进行处理意见和基本信息的登记。 项目三：尿液、粪便标本采集 一、项目分析 二、学习指导 尿液为无菌体液标本的一种，泌尿系统感染时尿液培养可确定病原菌，有利于临床针对性治疗。 据培养目的不同可以采集中段尿、肾盂尿、膀胱穿刺尿、24h尿标本，细菌培养最常用中段尿标本。中断尿采集时首先清洗外阴，然后排除阴唇、包皮干扰连续排尿，接取中段尿10～20ml于无菌容器内快速送检。 粪便标本为含丰富正常菌群的材料，但是肠道致病菌也可以出现在肠道感染的患者粪便中，选择培养病原菌是诊断肠道感染的常用技术。粪便标本采集方法有自然排便采集法和直肠拭子采集法。自然排便采集法是在自然排便后，挑取有脓血、粘液部分的粪便2～3g或液状粪便中的絮状物1～2ml盛于无菌的容器内快速送检，不能及时送检的标本可以选择适当的保存液（50%甘油盐水）或增菌培养基中送检；直肠拭子采集后置于无菌试管中快速送检，不能及时送检应放入卡-布运送培养基或pH7.0的磷酸盐甘油缓冲液中运送或保存。 接收到标本后，应该及时对标本进行评价，尿沉渣涂片染色镜检无杂菌（2种以上），即尿标本采集质量合格，检出单种细菌对临床有初步诊断价值。合格粪便标本应该新鲜、不干燥，带有病理成分的标本为好。最后登记病人信息和处理意见。 项目四：细菌形态结构辨认 一、项目分析 二、学习指导 学会使用显微镜油镜观察细菌的形态结构是微生物检验的基本技术，显微镜油镜是微生物检验不可缺少的工具。。细菌个体微小（几个微米），只有放大一千倍才能看到，因此必须使用油镜才能观察到细菌的形态和结构。显微镜油镜头由于焦距短、孔径小，总透光量少，为了减少折射光损失而使用密度与玻片密度相近的香柏油做介质。观察标本时先用低倍镜调节光路、调节焦距找到物象，再将香柏油滴在标本片上，转换油镜头，聚光器调至高点，光圈完全打开，缓慢调节细调节器直到物象清晰为止。 细菌基本形态有球形、杆形和螺旋形。染色标本可见革兰阳性葡萄球菌、链球菌、双球菌，革兰阴性杆菌、弧菌、双球菌。特殊结构可见荚膜、鞭毛、芽胞等。  项目五：细菌革兰染色 一、项目分析 二、学习指导 革兰染色是微生物检验中最常用的染色技术，是病原学检查不可缺少的基本技术。该技术包含三个阶段：制片、染色、镜检。制片是染色前的标本准备，包括涂片、干燥、固定三个步骤，每个步骤的实施都直接影响染色结果，正确进行涂片、干燥、固定是染色技术的质量保障。一般取被检材料少许，涂成1～1.5cm的涂膜，自然干燥或置于酒精灯上方 项目六：细菌抗酸染色 一、项目分析 二、学习指导 抗酸染色技术是检查分枝杆菌属细菌的基本技术，也是临床结核病病原学检查的最常用方法。 该技术包含制片、染色、镜检三个阶段。制片材料可以是痰液、尿液、粪便、脑脊液、胸腹水等标本。制片包含三个步骤：涂片、干燥、固定。取处理后的待检标本三环涂成厚涂片，在火焰上方温热环境中缓慢干燥，连续三次通过火焰外焰进行固定，然后进行染色。染色方法有加热助染法和冷染法，学生学习时常用冷染技术。染色包括初染、脱色、复染三个步