真核基因在大肠杆菌中的表达 (2).pptVIP

T7 噬菌体启动子：它是来自T7噬菌体的启动子，具有高度的特异性。 只有T7 RNA聚合酶才能使其启动，故可以使克隆化基因独自得到表达。T7 RNA聚合酶的效率比大肠杆菌 RNA聚合酶高5倍左右 第28页，共76页，编辑于2022年，星期五 第29页，共76页，编辑于2022年，星期五 第三节 真核基因在大肠杆菌中的表达 第30页，共76页，编辑于2022年，星期五 1. 外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位 细胞质中表达：易形成包涵体 包涵体：由不可溶性蛋白聚集折叠形成，是外源基因高效表达时常发生的一种特殊生理现象。 包涵体形成的理化参数： 电荷的平均数、形成转角的氨基酸残基的组分、半胱氨酸的组分、脯氨酸的组分、亲水性和氨基酸残基的总数。 第31页，共76页，编辑于2022年，星期五 表达蛋白形成包涵体的优缺点： 优点：易于分离 蛋白被保护而免受胞内酶的降解 蛋白质没有活性，不会对寄主细胞造成伤害 缺点：很难恢复生物学活性 蛋白质的终产量低 第32页，共76页，编辑于2022年，星期五 解决方案：限制包涵体的形成 ⑴ 外源基因与分子伴侣共表达 分子伴侣：能够阻止聚合作用而使蛋白质正确折叠。 ⑵ 使用硫氧还蛋白缺陷的寄主菌株 目的：维持有利的氧化还原电位 ⑶ 低温诱导，