基因工程基因获取和功能研究技术.pptVIP

* 基因工程基因获取和功能研究技术 一.重组DNA技术概论 3.1 RACE 技术 Rapid amplification of cDNA ends 已知基因一端序列, 快速获取另一端序列. 5’ RACE (获取5’序列) 3’ RACE (获取3’序列) 需要合成引物接头(单链DNA), 用RNA ligase将基因(RNA)与引物(DNA)连接. 5’ RACE 3’ RACE (非mRNA扩增) 合成两条互补的引物, 序列任意.及一条序列特异的引物 互补引物中一条5’标记 Pi, 通过RNA ligase 将其与RNA连接. 2.3 cDNA文库 cDNA: (1) 将mRNA反转录为双链DNA. (2) 特点: A.稳定; B.无内含子. 二. cDNA文库: (1) 代表了生物体某一器官或者组织mRNA中所含的全部或绝大部分遗传信息. (2) 特点: A.不同的生物, 同一生物不同组织, 同一组织不同发育时间或不同生理状态下, cDNA文库不同; B.建好的cDNA文库的具体的信息未知,仅提供钓取相关目的基因的材料. C.每个克隆不一定是全长基因 cDNA文库建库过程 1.高质量mRNA的制备; 2.反转录生成cDNA