生物分离工程离交换层析.pptVIP

离子交换层析（色谱） 一、原理 离子交换层析(Ion exchange chromatography, IEC)是 利用离子交换剂为固定相，根据荷电溶质与离子交换剂 之间静电相互作用力的差别进行溶质分离的层析法。 荷电溶质在离子交换剂上的分配系数可用下式表示： I — 流动相的离子强度，A和B为常数， 为离子强度无 限大时溶质的分配系数，是静电相互作用以外的非特异 性吸附引起的溶质在离子交换剂上的分配。 离子交换基： 阴离子：DEAE（二乙胺乙基）； QAE（季 胺乙基） 阳离子：CM（羧甲基）；SP（磺丙基） 对于蛋白质等两性电解质，在物理意义上， B为溶质的静电荷数与离子价数之比。在pH偏离 等电点的溶液中，蛋白质溶质的静电数常为两位 数以上，故B值较大，即蛋白质的分配系数对离 子强度非常敏感。在同一离子强度下，不同蛋白 质的分配系数相差非常大（几个数量级）。 洗脱方式： 恒定洗脱法：洗脱液（流动相）的离子强度不变； 缺点：对于在吸附柱上分配系数相差较大的蛋白 质很难实现很好的分离。 线性梯度洗脱法或阶段梯度洗脱法： 除GFC以外的层析操作均采用此种方法。 在洗脱过程中，流动相