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韩 雪 蕾;主要内容;干细胞;全能干细胞
Totipotent stem cells ;多能干细胞
Multipotent stem cells ;专能干细胞 ;胚胎性干细胞
Embryonic stem (ES) Cells ;组织干细胞
Tissue-specific stem cell;一、胚胎干细胞的生物学特点;;2.来源:
囊胚的内细胞团(ICM)
早期胚胎的种细胞或胎儿的原始生殖细胞。
ICM在胚胎着床前:分化出原始内胚层,紧贴着囊胚腔的内层生长,最后发育为卵黄膜;
ICM在胚胎着床后:分化为原始外胚层,进一步分化为胚胎的3个种细胞层,进一步发育为胎儿。
内消呼肝胰(内胚层发育为消化系统,呼吸系统,肝脏,胰脏)
外表感神仙(外胚层发育为表皮,感觉,神经系)
其余的是中胚层
;;3.细胞学特点
具有胚胎细胞的特性:形态上细胞体积较小,但是细胞核较大,核质比高,核仁较大,培育时呈克隆状生长,在功能上具有发育全能型,能进行 人为定向分化。
普通细胞系的特性:在体外培养传代而不发生分化,能进行冷冻保存和遗传改造。
发育全能性:
;1)形成畸胎瘤:将ES细胞接种同源动物皮下可形成内、中、外三种胚层细胞。
2)形成类胚体:将ES细胞在非黏附底物中悬浮培养生长,或控制增殖细胞数目,形成多种系混杂的集合体
;3)直系分化:通过控制ES细胞生长环境或遗传操纵特定基因表达,ES细胞可直接分化为某特定种系细胞。新的ES细胞建系后在体外生长时间越短,产生所有类型组织的可能性就越大。
4)形成嵌合体:组织和器官的细胞含有两个或两个以上基因型构建而成的完整个体,称为基因嵌合体或嵌合体动物。将ES细胞注射到同种动物囊胚腔中,可形成嵌合体。ES细胞或EG细胞一旦分化即丧失全能性,难以参与胚胎发育,形成嵌合体。;4.功能
在滋养层细胞上或在含有分化移植因子的介质中,能维持未分化状态,并实现自我更新,因此可以无限增殖;
在体外,在诱导因子的作用下,可以定向分化;泌乳小鼠胚胎干细胞已经在体外诱导分化为神经元细胞、肝细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞黑色素细胞等。
;ES细胞具有种系传递(germline transmission)能力,能够形成嵌合体动物(chimeric animal)。 若在体外把ES细胞注射至另一胚泡内,使之与受体胚胎细胞混合,再移植入假孕受体子宫,可发育获得嵌合体(chimeric)。
ES细胞可参与嵌合体各个器官包括生殖腺的发育。通过交配可以分离出带有ES细胞遗传性状的个体,这是ES细胞具有种系传递能力的一种证明。
;二、胚胎干细胞研究的意义;2.是研究细胞分化的理想手段
ES细胞仅在饲养层细胞上或添加白血病抑制因子或白细胞介素-6家族的培养液中维持不分化状态,当培养液中添加分化诱导剂时可以出现定向分化,如视黄酸诱导分化为神经元和神经胶质细胞,DMSO诱导分化为平滑肌细胞等。
通过研究ES细胞的分化特点,可揭示细胞内信号转导的路径,发现新的信号受体,揭示细胞分化和调亡的机理。;;3.研究基因功能的首选细胞
由于ES细胞具有稳定的核型,并易于诱捕外源基因,因此进行基因敲除或定向插入外源基因的理想细胞。
用遗传修饰的ES细胞生产嵌合体或用细胞核移植技术获得的克隆后代,通过观察后代的表型变化,可探明未知基因的生物学功能和表达调控规律。;4.是生产转基因动物的主要方法之一
用外源基因转染后,筛选阳性细胞,然后注入到囊胚腔或其他卵裂球聚合获得嵌合体后代,用转染的ES细胞分化为生殖干细胞,生产转基因阳性动物。
也可把转化后的ES细胞作为供体核,用细胞核移植技术直接获得转基因动物。;;5.ES细胞治疗技术将引起一场医学革命
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;6.可用于研究细胞癌变机理和新药物的筛选
细胞癌变主要是由于正常的细胞周期发生紊乱,细胞无序增殖所致。ES细胞在正常的培养环境中能维持稳定的核型,是研究致癌物质诱发细胞癌变机理的理想材料;
在研究新药过程中,需要对药物的作用机理和药效进行研究,ES细胞在体外能分化多种体细胞,可以直接作为实验材料来筛选新药,可缩短新药开发周期,且治疗的针对性强。;三 .胚胎干细胞的分离培养基本程序;小鼠多用3-4天的胚泡或2-3天的桑椹胚,;从胚泡中分离出细胞团的方法主要免疫外科学方法,显微外科学方法和组织培养法等。
其中组织培养法是将胚泡接种在饲养层上,模拟体内胚泡的着床,更接近自然发育过程,较易获得胚胎干细胞集落。
;(1)免疫外科学方法:该法的原理是利用囊胚腔对抗体的不通透性,通过抗体、补体结合对细胞的作用,去除滋养层细胞,保留ICM细胞进行培养。
以小鼠为例,将体外培养的小鼠胚泡去除透明带后,经抗小鼠脾细胞抗血清作用一定时
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