植物组织培养第三章植物器官和组织培养.pptVIP

茎尖分生组织培养 茎尖分生组织培养仅指长度不超过0.1mm茎尖的顶端圆锥区的培养，这么小的外植体是不易培养成功的，因此只有在用于某些植物获得无病原体的植物才采用，而一般都采用较大的带一个和几个叶原基的茎尖培养。 第62页，共98页，编辑于2022年，星期一 能得到无病毒的植株的主要原因是： 病毒侵染植株后，通过胞间连丝转移到其他细胞中，或依靠筛管进行转移。因此，病毒在患病植株上的分布是不均匀的，即老的成熟器官中病毒含量高，幼嫩未成熟的器官中病毒含量较低而茎尖分生组织，在细胞没有充分分化以前不受侵染，故几乎不带病毒。 第63页，共98页，编辑于2022年，星期一 1、培养技术 ①茎尖组织的分离 从未发病植株上，取正在生长的顶芽、萌发芽和球茎的中心芽。材料用70%的酒精浸没几秒到数十秒钟，再在稀释20倍的次氯酸钠中浸5—10分钟，用无菌水冲洗数次后，供组织分离用。 第64页，共98页，编辑于2022年，星期一 在无菌条件下进行无菌操作，把芽放在解剖镜下，用镊子、刀子、解剖针等工具，逐层把芽外面的幼叶和叶原基除去，使生长点露出，这时要细心，不要弄伤顶端圆锥体，用利刃切下含有1—2个叶原基的0.1-0.2mm长的生长点，然后接种到琼脂培养基上，切取生长点的大小，是培养能否取得成功的关键，原则是在生长点不带病毒的情况下，尽量取稍大些的生长点，这样易于培养成功。 第65页，共98页，编辑于2022年，星期一 ②培养： 常用的培养基有White(1943)，Morel(1995)，MS培养基等等。 2，4-D，IAA，NAA等生长素是必须的，它们能有效地促进芽的生长发育，但是浓度并能太高，一般用0.1mg/l左右即可，高于1.0mg/L，往往产生畸变芽或形成愈伤组织。 接种后的生长点，在培养基上生长很慢，再生植株往往需要几个月甚至一年以上。因此，注意满足其培养条件是十分重要的。生长点培养要求24—27℃的温度，最好给以日夜温差，适当的光周期和光。由于培养时间长，应注意培养基保湿，一般可用防湿的铝箔或塑料薄膜包裹解决。 第66页，共98页，编辑于2022年，星期一 茎尖经过适当培养后，可能发育的方向为： 芽萌发； 产生胚状体； 产生不定器官； 形成愈伤组织 第67页，共98页，编辑于2022年，星期一 ③脱毒试管苗植物的移植 Ⅰ嫁接—扦插法 把试管苗剪下，先嫁接在砧(zhen)木上，然后再扦插成活，最后长成植株。 Ⅱ移植法 当试管苗长到数厘米和形成较多的根系时，打开试管盖，放在室内窗口处炼苗2—3天。然后小心取出苗，洗去根上的琼脂以免滋生细菌，再移栽至小花盆中。 第68页，共98页，编辑于2022年，星期一 病毒植物的鉴定 第69页，共98页，编辑于2022年，星期一 1、无菌苗的建立 目的：从所取用的外植体诱发芽的形成，以获得无菌苗。 可能有四种不同结果： 一是得到单生芽， 二是得到丛生芽：细胞分裂素水平高时 三是得到长根的完整植株。 四是得到愈伤组织：生长素水平较高时 作为快速繁殖而言，我们希望属于第一、第二结果，它有利于提高繁殖系数，加速繁殖速度。 第30页，共98页，编辑于2022年，星期一 2、无菌苗的增殖 ⑴增殖的途径 一是诱导形成大量的胚状体 二是诱导形成大量的不定芽 三是促进腋芽的快速形成。 第31页，共98页，编辑于2022年，星期一 2、无菌苗的增殖 优缺点： 第一、二种途径的好处是增殖速度快，但会产生变异， 第三种途径的好处是不会产生变异，能保持品种优良特性，且方法简便，可在各种植物上使用，但增殖速度不如前二者。 若用于育种，以第一、第二种途径有利，而用于良种快速增殖，以第三种途径有利，主要是要保证良种的优良品性，不产生变异。目前已广泛采用，每年每个芽可增殖10万株乃至上百万株。 第32页，共98页，编辑于2022年，星期一 ⑵腋芽增殖的原理 高等植物的每个叶腋中都有腋芽存在，通常由于顶芽的存在，顶端优势阻止腋芽的生长，但在一定的条件下可以使它生长，如除去顶芽或使用生长激素，可以解除顶端优势，腋芽便不断分化和生长，逐渐形成芽丛。 若反复切割这些腋芽和移植到新的培养基中继代培养，就可在短期内得到大量的芽。 第33页，共98页，编辑于2022年，星期一 ⑶影响增殖成功的关键因素 A、细胞分裂素 在腋芽增殖上的主要措施是用细胞分裂素抑制顶端优势，促进腋芽生长发育，所以在这一阶段培养基中添加细胞分裂素是必须的。 实践证实，除个别的例子外，加入细胞分裂素是行之有效的。6-BA对促进腋芽增殖是最有效，依次为KIN和2ip。一般浓度在0.25mg/l以上，少数用1.0mg/L，个别的用5mg/L。 第34页，共98页，编