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苏丹红检测方法 (中文)
?
欧洲委员会
健康与消费者保护综合委员会
第四分委员会―生产与流通过环节的食品安全
第三部―物理化学危害物监督
新方法声明:03/99
主题:苏丹红检测方法的更正
以前的3/92新方法声明在此更正(原方法4.12.1存在错误:正确的数字是100ml而不是50ml)
代办处已收到来自法国的方法声明内容如下:
辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析
O.Veretout,L.Demesse,L.Szymanski
1 应用范围
本方法涉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹橙B、苏丹红7B和胭脂树橙的检测。
2 定义
苏丹红是应用于诸如油彩、蜡、地板蜡和香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂,一般不溶于水易溶于有机溶剂,胭脂树橙是一种食品着色剂但不允许在辣椒粉和调味品中使用。
3 方法要点
上述着色剂经乙腈提取后,过滤,滤液用反相高效液相色谱仪进行色谱分析。以波长可变的紫外―可见检测器定性与定量。
4 试剂与标准品
除有特殊指明外,本方法中涉及试剂均为分析纯,实验用水均为蒸馏水、去离子水或相同质量的分析用水。
4.1 乙腈 色谱纯
4.2 水 色谱级
4.3 冰醋酸
4.4 氯仿
4.5 苏丹红1号(Aldrich Chemical Company)
4.6 苏丹红2号(Acros organics 化工合成有机物)
4.7苏丹红3号(Acros organics 化工合成有机物)
4.8苏丹红4号(Acros organics 化工合成有机物)
4.9苏丹橙B(Acros organics 化工合成有机物)
4.10 苏丹红7B(Acros organics 化工合成有机物)
4.11 胭脂树橙(特殊合成产品)
4.12 标准溶液
4.12.1 标准贮备液
称取50.0mg着色剂(按产品标明的纯度折算成纯着色剂)并按以下方式移入100ml容量瓶定容。
着色剂
溶解和转移溶剂
定容溶剂
苏丹红1号
乙腈
乙腈
苏丹红2号
乙腈
乙腈
苏丹红3号
氯仿
乙腈
苏丹红4号
氯仿
乙腈
苏丹橙B
乙腈
乙腈
苏丹红7B
乙腈
乙腈
胭脂树橙
氯仿
氯仿
4.12.1 标准工作液
取上述标准贮备液各5ml移入50ml容量瓶中以乙腈定容,再分别从以上容量瓶中吸取0.5ml、1ml、2.5ml、4ml和5ml溶液移入50ml容量瓶中以乙腈定容,此时溶液中各种着色剂的浓度分别为0.5,1,2.5,4和5μg/ml。
5 仪器与设备
5.1 万分之一天平
5.2 250ml具塞三角瓶
5.3 直径10cm的漏斗
5.4 50ml容量瓶
5.5 5ml移液枪
5.6 100ml量筒
5.7 5ml一次性注射器
5.8 0.45μm滤膜
5.9 185mm滤纸
5.10 打浆机
5.11 Ultra Turrax均质机
5.12 配有紫外-可见检测器的高效液相色谱仪
5.13 色谱柱 LiChroCART250-4HPLC Cartbridge Supersher 100RP18
5.14 进样瓶
6 样品制备
将采集样品放入一个容量较大的密闭容器中混合均匀。对于固体样品要用打浆机或粉碎机磨细。
7 操作方法
7.1 样品处理
7.1.1 甜椒或红辣椒粉
称取10g(准确至0.01g)样品于三角瓶中,用量筒加入100ml乙腈。
7.1.2 粉状调味品
称取5g(准确至0.01g)样品于三角瓶中,用量筒加入100ml乙腈。
7.1.3 调味辣椒酱、原味辣椒酱、辣椒油等
称取20g(准确至0.01g)样品于三角瓶中,用量筒加入100ml乙腈。
7.1.4 Merguez香肠、西班牙加调料的口利左香肠和肉制品
称取20g(准确至0.01g)样品于三角瓶中,用量筒加入100ml乙腈。
之后在Ultra Turrax中充分混合数分钟,振荡1小时后过滤于三角瓶中。检测样品取样量和其稀释液浓度要视产品中的辣椒含量而定,以符合液相色谱检测限的要求。
7.2 高效液相色谱测定
7.2.1 流动相
溶剂A:酸性水溶液(165ml乙酸溶于1000ml水中)
溶剂B:乙腈
7.2.2 梯度洗脱
时间
溶剂A%
溶剂B%
梯度曲线
0
30
70
线性
20.0
5
95
线性
30.0
0
100
线性
42.0
0
100
?
流速:0.7ml/min
基线稳定后开始进样
两次进样间隙时间为10分钟
7.2.3 进样量:10μl
7.2.4检测波长
在300nm到600nm波长范围进行扫描,确定三个测定波长(432nm,478nm和520nm)
7.2.5 标准曲线
用5个标准工作溶液的测定值绘制标准曲线,各种色素的标准曲线分别在最大吸收波长处由5点回归计算(苏丹橙B在432nm波长有
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