生物化学酶促反应动力学.pptVIP

关于生物化学酶促反应动力学 第1页，共19页，编辑于2022年，星期一 pH对酶活性的影响 实验原理 只有当酶蛋白处于一定的构象及电荷状态，才有利于酶和底物的结合和催化，使酶促反应最强，因此酶反应介质的pH可影响酶分子。在某一pH时，酶的催化活性达到最大值，该pH称为酶的最适pH。碱性磷酸酶的最适pH为8~12。 本实验采用磷酸苯二钠法，在不同的pH值的甘氨酸缓冲液条件下，测定其活性，从而确定其最适pH。 以磷酸苯二钠为底物，被碱性磷酸酶水解后则产生游离酚和磷酸盐。酚在碱性溶液中与氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化可产生红色的醌类衍生物。根据红色深浅就可测出酶的活性，从而得出酶的最适pH。 第2页，共19页，编辑于2022年，星期一 反应式如下： 第3页，共19页，编辑于2022年，星期一 实验材料 甘氨酸缓冲液、0.04mol/L底物液、酶液、0.1mol/L pH10碳酸盐缓冲液、0.5%铁氰化钾液、酚标准液、 pH8.8Tris-乙酸缓冲液、碱液、0.3% 4-氨基安替比林液、0.04mol/L Na2HPO4 第4页，共19页，编辑于2022年，星期一 实验方法 1.取试管6支 ，编号，表操作 管号 1 2 3 4 5 6 各pH甘氨酸 pH8.0 pH9.0 pH10.0 pH11.0 pH12.0 ------ 缓冲液（ml） 1.0 1.0