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酶的固定化与化学修饰 第1页，共24页，编辑于2022年，星期三 酶 由生物体产生的具有催化能力的物质 目前在已知的酶中，除少量的酶是核酸酶(Nucleic acid enzyme)，绝大多数都是蛋白质(Proteinenzyme)。 第2页，共24页，编辑于2022年，星期三 酶作为催化剂的优点 催化效率高 专一性强 酶活可控 反应条件温和 无污染 第3页，共24页，编辑于2022年，星期三 酶的缺点 酶的高级结构对环境十分敏感 对热、强酸、强碱、有机溶剂等不够稳定 从反应体系中回收困难 易于造成产物污染使得产物提纯困难，从而导致生产成本的提高 第4页，共24页，编辑于2022年，星期三 为改进以上酶的缺点，酶固定化技术产生↓ 酶被束缚于一定的环境中，从而与整体环境分割开，但仍能有效地进行酶催化反应 第5页，共24页，编辑于2022年，星期三 酶的固定化应用 固定化酶与自由酶相比，易于将底物与产物分开;有利于进行连续反应;可以提高酶的稳定性;可以控制酶催化的过程;产物中没有酶的残留，简化了提纯工艺;酶可以反复使用，降低了成本。另一方面，具有分离功能的膜材料作为一种重要的功能材料，能够对气体、有机物、各类生物制剂等进行有效的分离、浓缩、纯化，己在化工、冶金、环保、生物工程等诸多领域得到了广泛的应用。膜材料还可以作为酶的固定化载体，实现酶在膜上的固定化。固定化酶膜能够将膜的分离功能和酶的催化功能结合起来，从而具有其它载体材料无可比拟的优越性。这项技术在生物反应器、生物传感器以及药物控制释放等领域都有着非常重要的应用价值。因此，酶在膜材料上的固定化技术己经成为热点研究领域之一 第6页，共24页，编辑于2022年，星期三 酶的固定方法 包埋法 共价法 交联法 吸附法 第7页，共24页，编辑于2022年，星期三 吸附法 1969年最早应用于工业的固定化酶即DEAE-Sephadex-A25吸附的氨基酞化酶。酶和载体间的作用力可以是氢键、疏水键、Tr一电子亲和力、离子键合力等。此法操作简便、固定化过程温和、酶活力回收率高、载体易得且可再生。但酶和载体的结合力较弱，酶易受外界因素的影响而脱落。 第8页，共24页，编辑于2022年，星期三 共价化合法 通过在酶分子与载体之间形成共价键来制备固定化酶的方法 目前研究和应用较多的一类方法 可用于共价结合的酶分子官能团有氨基、羧基、酚基、咪唑基等 要有载体的参与 根据固定化过程中共价结合反应的性质，共价结合法又可分为以下三类: 戊二醛法、叠氮法、碳二亚胺法。 第9页，共24页，编辑于2022年，星期三 交联法 用双官能团或多官能团试剂作为交联剂，使酶分子之间发生交联从而实现酶固定化的方法 常用的交联剂有己撑二异氰酸酯、双重氮联苯胺、顺丁烯二酸酐和戊二醛等 缺点：交联法由于反应条件比较激烈，在固定化过程中有涉及酶分子的化学反应，因而酶失活较为严重 第10页，共24页，编辑于2022年，星期三 包埋法 分类：网格型和微囊型 网格型：将酶分子包埋于高分子凝胶细微 网格中 微囊型：将酶包埋在高分子半透膜中 优点：制备方法简单，条件温和，一般不涉及酶分子的化学变化，因而酶活力回收率高 第11页，共24页，编辑于2022年，星期三 新型酶固定方法 分类： 定点固定化 利用等离子体技术进行固定化 酶结晶(沉淀)交联固定化 第12页，共24页，编辑于2022年，星期三 新型酶固定方法 定点固定化 由于酶分子往往带有多个氨基，造成固定化酶在载体上有多种取向，形成随机固定化。定点固定化技术可以使酶分子在载体表面形成高度有序的酶分子二维排列，从而提高固定化酶的活性 。 等离子体技术 可以产生各种能量粒子，利用这项技术对载体材料进行表面修饰，可在其表面引入轻基、氨基、梭基、拨基等功能性基团，从而有利于进行酶的固定化 第13页，共24页，编辑于2022年，星期三 新型酶固定方法 酶结晶(沉淀)交联技术 即先将酶结晶或沉淀，再对酶分子进行交联处理的固定化方法。这种方法酶活性损失较少，且稳定性好，被认为是一种很有前途的酶固定化技术 。 因为酶的结晶技术要求很高，作为一种替代，也可以采用酶沉淀交联技术 第14页，共24页，编辑于2022年，星期三 酶固定化的载体 根据载体材料的化学组成可以将其分为三大类: 无机材料 天然大分子 合成聚合物。 第15页，共24页，编辑于2022年，星期三 无机材料 使用无机材料作为酶固定化载体有以下一些优点:机械强度高:耐有机溶剂、酸、碱、盐性能好;易于再生等 第16页，共24页，编辑于2022年，星期三 天然大分子 天然大分子材料无毒害，亲水性好，具有适合酶催